Apoptosis Activator 2 Caspase activator

Apoptosis Activator 2 (20 μM) bij de verlaagde cyto c concentratie verhoogt de fractie Apaf-1 in het apoptosoom met 1,5-voudig tot 33%. Deze verbinding verhoogt de mate van caspase-3 activering bij het verlaagde niveau van cyto c en caspase-3 activering met 4-voudig. Het induceert sterk caspase-3 activering, PARP splitsing en DNA fragmentatie, en doodt uiteindelijk cellen met een IC50 van 4 μM. Deze activator induceert Apoptosis van PBL, HUVEC, Jurkat, Molt-4, CCRF-CEM, BT-549, MDA-MB-468 en NCI-H23 met een IC50 van 50 μM, 43 μM, 4 μM, 6 μM, 9 μM, 20 μM, 44 μM en 35 μM. Het oefent een cytostatisch effect uit op de meerderheid van de geteste tumorcellijnen, waarbij de celgroei met 50-100% wordt geremd bij 10 μM in 40 van de 48 geteste cellijnen. [1] Deze chemische stof induceert celdood door het opwekken van apoptosoomvorming. Het niveau van En1-expressie heeft geen significante invloed op de overlevingspercentages van ventrale middenhersenkweken voor deze verbinding (-8,1 ± 6,0%). De overlevingskans wordt niet significant gewijzigd als de andere drie reagentia worden gebruikt (-10,7 ± 4,7%) voor deze activator. [2] Deze verbinding (10 μM) induceert Apoptosis in AGS-cellen, zoals geëvalueerd door apoptotische DNA-ladder en Tunel-assay. Het (10 μM) verhoogt de inductie van Apoptosis door anti TROP2 geconjugeerde liposomen. [3] Cyclohexamide (10 μg/mL) of zVAD (50 μM) beschermt significant tegen deze chemische toxiciteit in neuronale kweken. Deze activator (3 μM) resulteert in talrijke neuronen met pyknotische kernen die wijzen op celdood waarbij Apoptosis betrokken is. DHT (10 nM) of E2 (10 nM) beschermt significant tegen de toxiciteit van deze verbinding in neuronale kweken. [4]

Celvrije Apoptosis Assay

Cytoplasmatische extracten van HeLa-cellen worden bereid volgens eerder gepubliceerde rapporten. Apoptosis Activator 2 in DMSO wordt verdeeld over 96-well microtiterplaten met een eindconcentratie van 1 mM (uiteindelijke DMSO-concentratie is 1% vol/vol). Aan elk putje wordt 250 μg totaal eiwit uit cytoplasmatische extracten in HEB-buffer (50 mM Hepes, pH 7,4/50 mM KCl/5 mM EGTA/2 mM MgCl), met 2 mM DTT, 2 μM cyto c en 0,5 μM DEVD-AFC (Asp-Glu-Val-Asp-7-amino-4-trifluoromethylcoumarin) substraat in een totaal van 150 μL toegevoegd. Platen worden geïncubeerd bij 37 ℃, en fluorescentie wordt elke 10 minuten afgelezen in een LJL Biosystems plaatlezer.