Home PI3K/Akt/mTOR PI3K remmer ZSTK474

uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

ZSTK474 PI3K remmer

Cat.Nr.S1072

ZSTK474 remt klasse I PI3K-isoformen met een IC50 van 37 nM in een celvrije test, voornamelijk PI3Kδ. Fase 1/2.
ZSTK474 PI3K remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Moleculair gewicht: 417.41

Ga naar

Kwaliteitscontrole

Batch: Zuiverheid: 99.98%
99.98

Celkweek, behandeling & werkconcentratie

Cellijnen Assaytype Concentratie Incubatietijd Formulering Activiteitsbeschrijving PMID
Sf21 insect cells Function assay 1 h Inhibition of bovine recombinant PI3K p110delta expressed in Sf21 insect cells using phosphatidylinositol as substrate after 1 hr by phosphoimaging, IC50=0.7 nM
human HCT116 cells Function assay 15 mins Inhibition of PIK3CA H1047R mutant-mediated cell signaling in human HCT116 cells expressing PTEN assessed as inhibition of insulin-induced pAkt/PKB phosphorylation at Thr308 treated for 15 mins before insulin challenge measured after 5 mins by immunoblotting, IC50=78 nM
human LNCAP cells Proliferation assay 3 days Antiproliferative activity against human LNCAP cells after 3 days by MTS assay, IC50=0.21 μM
human NZB5 cells Proliferation assay 5 days Antiproliferative activity against human NZB5 cells expressing wild type p110alpha assessed as incorporation of [3H]thymidine after 5 days, IC50=0.22 μM
human NZOV9 cells Proliferation assay 5 days Antiproliferative activity against human NZOV9 cells expressing p110alpha kinase Y1021C mutant assessed as incorporation of [3H]thymidine after 5 days, IC50=0.29 μM
human MDA-MB-468 cells Cytotoxic assay 48 h Cytotoxicity against PTEN-deficient human MDA-MB-468 cells assessed as inhibition of cell growth after 48 hrs by Cell Titer 96 assay
human A549 cells Function assay 10 μM 1 h Inhibition of PI3K in human A549 cells assessed as reduction in pAkt level at 10 uM after 1 hr by Western blotting analysis
human DMS114 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human DMS114 cells
human MKN74 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human MKN74 cells
human SNB78 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human SNB78 cells
human St-4 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human St-4 cells
human DU145 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human DU145 cells
human LOXIMVI cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human LOXIMVI cells
human PC3 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human PC3 cells
human LOXIMVI cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human LOXIMVI cells
human OVCAR3 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human OVCAR3 cells
human SKOV3 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human SKOV3 cells
human KM12 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human KM12 cells
human HT-29 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human HT-29 cells
human HCT15 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human HCT15 cells
human NCI-H226 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human NCI-H226 cells
human NCI-H522 cells  Growth inhibition assay Growth inhibition of human NCI-H522 cells 
human A549 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human A549 cells
human HCC2998 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human HCC2998 cells
human SNB75 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human SNB75 cells
human OVCAR4 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human OVCAR4 cells
human OVCAR5 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human OVCAR5 cells
human OVCAR8 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human OVCAR8 cells
human SKOV3 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human SKOV3 cells
human ACHN cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human ACHN cells
Klik om meer experimentele gegevens over de cellijn te bekijken

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit

Moleculair gewicht 417.41 Formule

C19H21F2N7O2

 Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)
CAS-nr. 475110-96-4 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles C1COCCN1C2=NC(=NC(=N2)N3C4=CC=CC=C4N=C3C(F)F)N5CCOCC5

Oplosbaarheid

In vitro
Batch:

DMSO : 15 mg/mL (35.93 mM)
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Moleculair gewicht
Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo
Batch:

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH2O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme

Kenmerken
First orally administered PI3K inhibitor used in vivo.
Targets/IC50/Ki
PI3Kδ
(Cell-free assay)
4.6 nM
PI3Kα
(Cell-free assay)
16 nM
PI3K
(Cell-free assay)
37 nM
PI3Kβ
(Cell-free assay)
44 nM
PI3Kγ
(Cell-free assay)
49 nM
In vitro

ZSTK474 bij 1 μM vermindert de PI3K-activiteit potent met 4,7% van het controleniveau, terwijl LY2194002 de activiteit slechts tot 44,6% van de controle vermindert. Deze verbinding remt de activiteiten van recombinante p110β, -γ, en -δ met IC50 van respectievelijk 17 nM, 53 nM en 6 nM. Het vertoont een potente antiproliferatieve activiteit tegen een panel van 39 menselijke kankercellijnen met een gemiddelde GI50 van 0,32 μM, effectiever dan die van LY294002 of wortmannine met een gemiddelde GI50 van respectievelijk 7,4 μM of 10 μM. Deze chemische behandeling bij 1 μM blokkeert membraanruffeling en de aanmaak van PIP3 geïnduceerd door bloedplaatjesafgeleide groeifactor in muizen embryonale fibroblasten (MEF's). Het induceert bij 10 μM apoptose in OVCAR3-cellen en induceert volledige G1-fase-arrestatie maar geen apoptose in A549-cellen. Deze verbindingbehandeling bij 0,5 μM vermindert significant het niveau van gefosforyleerde Akt en GSK-3β, evenals de cycline D1-eiwitexpressie. Het remt ook de fosforylering van andere stroomafwaartse signaalcomponenten die betrokken zijn bij het reguleren van celproliferatie, waaronder FKHRL1, FKHR, TSC-2, mTOR en p70S6K, op een dosisafhankelijke manier. Deze chemische stof remt mTOR niet bij 0,1 μM, en zelfs bij een concentratie van 100 μM remt het de mTOR-activiteit minder dan 40%. Het blokkeert VEGF-geïnduceerde celmigratie en buisvorming in menselijke navelstrengendotheelcellen (HUVEC's) en remt de expressie van HIF-1α en secretie van VEGF in RXF-631L-cellen, vertoont een potente in vitro antiangiogene activiteit. Deze verbindingbehandeling remt de productie van IFNγ en IL-17 in concanavaline A-geactiveerde T-cellen en remt de proliferatie en PGE(2)-productie door fibroblastachtige synoviale cellen (FLS).

Kinase Assay
Remming van PI3K-activiteit
A549-cellen worden gelyseerd in een buffer die 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 5 mM EDTA en 1% Igepal CA-630 bevat. De lysaten worden gedurende 10 minuten bij 20.000 g en 4 °C gecentrifugeerd en de supernatanten worden gebruikt als celysaat (eiwit = 2-4 mg/mL). Om PI3K te immunoprecipiteren, worden 200 μL celysaat geïncubeerd met anti-p85 polyklonaal antilichaam en proteïne G-agarose (5 μL). PI3Kα, PI3Kβ en PI3Kδ kunnen worden geïmmunoprecipiteerd door het anti-p85 polyklonaal antilichaam. Agarosekorrels die immunoprecipitaten bevatten, worden tweemaal gewassen met buffer A (20 mM Tris-HCl bij pH 7,5, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA en 1% Igepal CA-630), eenmaal met buffer B (500 mM LiCl en 100 mM Tris-HCl bij pH 7,5), eenmaal met gedestilleerd water en eenmaal met buffer C (100 mM NaCl en 20 mM Tris-HCl bij pH 7,5). Immunoprecipitaten worden gesuspendeerd in 20 μL buffer C die fosfatidylinositol van 200 μg/mL bevat. Het mengsel wordt 5 minuten bij 25 °C voor-geïncubeerd met toenemende concentraties van deze verbinding. [γ-32P]ATP (2 μCi per testmengsel; eindconcentratie, 20 μM) en MgCl2 (eindconcentratie, 20 mM) worden toegevoegd om de reactie te starten. Het reactiemengsel wordt gedurende 20 minuten bij 25 °C geïncubeerd. Gefosforyleerde producten van fosfatidylinositol worden gescheiden door dunnelaagchromatografie en gevisualiseerd door autoradiografie. Het fosfatidylinositol-3-fosfaatgebied wordt van de plaat geschraapt en de radioactiviteit wordt ook gemeten met vloeistofscintillatiespectroscopie. Het remmingsniveau voor deze chemische stof wordt bepaald als het percentage 32P-tellingen per minuut verkregen zonder deze verbinding.
In vivo
Orale toediening van ZSTK474 remt de groei van subcutaan geïmplanteerde muis B16F10 melanoomtumoren op een dosisafhankelijke manier, wat op dag 14 een tumorregressie van respectievelijk 28,5%, 7,1% of 4,9% oplevert bij 100, 200 of 400 mg/kg, wat superieur is aan die van de vier belangrijkste antikankermedicijnen bij hun respectieve maximaal tolereerbare doses met een tumorregressie van respectievelijk 96%, 35,7%, 24% of 68,3%. Deze verbindingbehandeling bij 400 mg/kg remt de groei van A549-, PC-3- en WiDr-xenografts bij muizen volledig en induceert de regressie van A549-xenografttumoren. Het remt significant de tumorgroei in het RXF-631L-xenograftmodel, gecorreleerd met een significant verminderd aantal microvaten in de behandelde muizen. Orale toediening van deze chemische stof verbetert de progressie van adjuvant-geïnduceerde artritis (AIA) bij ratten.
Referenties
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19372588/
  • [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22039466/
  • [6] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22349137/

Toepassingen

Methoden Biomarkers Afbeeldingen PMID
Western blot p-PDK1 / p-GSK3β / p-AKT / AKT P-gp / MRP1 p-Rb / p27 / Cyclin D1 HIF-1α / HIF-1β
S1072-WB1
28388564
Growth inhibition assay Cell viability
S1072-viability1
28388564

Technische ondersteuning

Gebruiksaanwijzing

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Als u nog andere vragen heeft, kunt u een bericht achterlaten.

Gelieve uw naam in te voeren.
Gelieve uw e-mailadres in te voeren. Voer een geldig e-mailadres in.
Schrijf alstublieft iets voor ons.