Opaganib (ABC294640) SPHK remmer

Ga naar

Kwaliteitscontrole

Batch: Zuiverheid: 99.73%

99.73

Gerelateerde doelwitten	PD-1/PD-L1 CXCR STING AhR Immunology & Inflammation related CD markers Interleukins Anti-infection Antioxidant COX
Overige SPHK Inhibitoren	PF-543 hydrochloride SKI II K6PC-5 Defensamide (MHP) SKI-V SKI-178

Celkweek, behandeling & werkconcentratie

Cellijnen	Assaytype	Incubatietijd	Activiteitsbeschrijving	PMID
Sf9	Function assay		Inhibition of human recombinant SphK2 expressed in Sf9 cells assessed as radiolabeled products using 10 uM sphingosine and 10 uM gamma[32P]ATP by liquid scintillation counting, Ki=9.8μM	25643074
Sf9	Function assay	2 hrs	Inhibition of recombinant human full-length N-terminal His-tagged SK2 expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells using NBD-Sph as substrate measured after 2 hrs by fluorescence based HPLC analysis, Ki=9.8μM	30889352
Klik om meer experimentele gegevens over de cellijn te bekijken

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit

Moleculair gewicht	380.91	Formule	C₂₃H₂₅ClN₂O	Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)	3 jaar-20°Cpoeder
CAS-nr.	915385-81-8	SDF downloaden		Opslag van stamoplossingen	1 jaar-80°Cin oplosmiddel 1 maand-20°Cin oplosmiddel
Synoniemen	N/A			Smiles	C1C2CC3(CC1CC(C2)(C3)C(=O)NCC4=CC=NC=C4)C5=CC=C(C=C5)Cl

Oplosbaarheid

In vitro
Batch:

DMSO : 76 mg/mL (199.52 mM)
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Ethanol : 28 mg/mL

Water : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa	Concentratie	Volume	Moleculair gewicht
=	×	×

Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo Batch:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	10%DMSO 1 40%PEG300 2 5%TWEEN80 3 45%ddH2O Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor aangepaste tests.	24.000mg/ml (63.01mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 100 μL of 240 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 450 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

Dosering: mg/kg Gemiddeld gewicht van dieren: g Doseervolume per dier:μL Aantal dieren:

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH₂O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme

Targets/IC₅₀/Ki	SphK2 (Cell-free assay) 60 μM
In vitro	Opaganib (ABC294640) verandert de ceramide/S1P-verhouding aanzienlijk, wat consistent is met remming van SK-activiteit in MDA-MB-231-cellen. Het remt de proliferatie van tumorcellen met IC50-waarden variërend van ongeveer 6 tot 48 μM en belemmert de migratie van tumorcellen gelijktijdig met het verlies van microfilamenten. Deze verbinding induceert niet-apoptotische celdood, morfologische veranderingen in lysosomen, vorming van autofagosomen en een toename van zure blaasjes in A-498-, PC-3- en MDA-MB-231-cellen. In zowel MCF-7- als ER-getransfecteerde HEK293-cellen vermindert het de E2-gestimuleerde ERE-luciferase-activiteit.
Kinase Assay	Sphingosine Kinase Assays
Kinase Assay	De IC50-waarden voor Opaganib (ABC294640) en DMS worden bepaald door een nieuw ontwikkelde HPLC-gebaseerde SK-activiteitsassay. Kort gezegd, de testverbindingen worden geïncubeerd met recombinant SK1 of SK2 en NBD-Sph in de isozym-selectieve assaybuffers zoals hieronder beschreven, met 1 mg/ml vetzuurvrij bovine serumalbumine, 100 μM ATP en 400 μM MgCl₂. Het product, d.w.z. NBD-S1P, wordt gescheiden van NBD-Sph door HPLC als volgt: Waters 2795 HPLC-systeem met een Waters 2495 fluorescentiedetector, C8 Chromolith RP-8e kolom (100 × 4,6 mm), 1 ml/min mobiele fase (acetonitril/20 mM natriumfosfaatbuffer, pH 2,5, bij 45:55). Fluorescentie wordt gemeten met excitatie bij 465 nm en emissie bij 531 nm. De verhouding van NBD-S1P/(NBD-Sph + NBD-S1P) wordt gebruikt als maat voor de SK-activiteit. SK-isozym-selectieve assaybuffers bevatten elk 20 mM Tris, pH 7,4, 5 mM EDTA, 5 mM EGTA, 3 mM β-mercapto-ethanol, 5% glycerol, 1× protease-remmers en 1× fosfatase-remmers. Voor de SK1-assaybuffer wordt 0,25% (eindconcentratie) Triton X-100 toegevoegd; en voor de SK2-buffer wordt 1 M (eindconcentratie) KCl toegevoegd. Assays worden 2 uur bij kamertemperatuur uitgevoerd, waarna een 1,5 volume methanol wordt toegevoegd om de kinase-reactie te beëindigen. Na 10 minuten worden de monsters gecentrifugeerd bij 20.000 g om het neergeslagen eiwit af te pelletten, en de supernatanten worden geanalyseerd door HPLC. In experimenten om de Ki voor remming van SK2 door deze verbinding te bepalen, wordt het ADP Quest-assaysysteem gebruikt om de kinase-activiteit te meten in aanwezigheid van variërende concentraties sphingosine en de verbinding. Om de effecten van Opaganib op cellulaire SK-activiteit te bepalen, worden bijna-confluente MDA-MB-231-cellen 's nachts serum-verhongerd en vervolgens behandeld met variërende concentraties van de verbinding. De cellen worden vervolgens geïncubeerd met [³H]sphingosine bij een eindconcentratie van 1 μM. De cellen nemen de exogene sphingosine op, die wordt omgezet in S1P via SK-activiteit, en [³H]S1P wordt gescheiden van [³H]sphingosine door extractie en gekwantificeerd door scintillatietelling.
In vivo	Opaganib (ABC294640) vermindert significant de tumorgroei bij muizen met mammatumor-xenografts, geassocieerd met uitputting van S1P-niveaus. In ernstig gecombineerde immuundeficiënte muizen met A-498-xenografts vertraagt het de tumorgroei en verhoogt het autofagiemarkers. Deze verbinding beschermt ook tegen levertransplantatie-geïnduceerde ontsteking en cross-talk tussen aangeboren en adaptieve immuniteit, belangrijke gebeurtenissen die graftletsel veroorzaken en verergeren, en verbetert de leverfunctie en overleving.
Referenties	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20061445/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20179157/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20861237/ [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22848628/

Toepassingen

Methoden	Biomarkers	Afbeeldingen	PMID
Western blot	c-Myc pRb / Rb H3K9ac / p21 p-STAT3 / STAT3		27517489
Growth inhibition assay	Cell proliferation		25122609

Informatie klinische proef

(gegevens van https://clinicaltrials.gov, bijgewerkt op 2024-05-22)

NCT-nummer	Rekrutering	Aandoeningen	Sponsor/Medewerkers	Startdatum	Fasen
NCT02939807	Withdrawn	Carcinoma Hepatocellular	Medical University of South Carolina\|National Cancer Institute (NCI)\|Apogee Biotechnology Corporation	September 30 2019	Phase 2
NCT03377179	Completed	Cholangiocarcinoma\|Cholangiocarcinoma Non-resectable\|Cholangiocarcinoma Perihilar\|Cholangiocarcinoma Extrahepatic\|Cholangiocarcinoma Intrahepatic	RedHill Biopharma Limited	March 7 2018	Phase 2
NCT02757326	Terminated	Multiple Myeloma	RedHill Biopharma Limited\|Apogee Biotechnology Corporation\|Duke University\|National Cancer Institute (NCI)	December 13 2016	Phase 1\|Phase 2
NCT02229981	Withdrawn	Diffuse Large B Cell Lymphoma\|Kaposi Sarcoma	RedHill Biopharma Limited\|Louisiana State University Health Sciences Center in New Orleans\|Apogee Biotechnology Corporation	July 2014	Phase 1\|Phase 2
NCT01488513	Completed	Pancreatic Cancer\|Unspecified Adult Solid Tumor Protocol Specific	RedHill Biopharma Limited\|Apogee Biotechnology Corporation\|Medical University of South Carolina\|FDA Office of Orphan Products Development\|National Cancer Institute (NCI)	August 2011	Phase 1

Technische ondersteuning

Gebruiksaanwijzing

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Als u nog andere vragen heeft, kunt u een bericht achterlaten.

C1=C0/X	C1:	LOG(C1):
C2=C1/X	C2:	LOG(C2):
C3=C2/X	C3:	LOG(C3):
C4=C3/X	C4:	LOG(C4):
C5=C4/X	C5:	LOG(C5):
C6=C5/X	C6:	LOG(C6):
C7=C6/X	C7:	LOG(C7):
C8=C7/X	C8:	LOG(C8):

Chemische structuur

Moleculair gewicht: 380.91