Home Immunology & Inflammation SPHK Remmer Opaganib (ABC294640)

uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

Opaganib (ABC294640) SphK2-remmer

Cat.Nr.: S7174

Opaganib (ABC294640) is een oraal biologisch beschikbare en selectieve sfingosine kinase-2 (SphK2) remmer met een IC50 van ongeveer 60 μM. Fase 1/2.
Opaganib (ABC294640) SPHK Remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Moleculair gewicht: 380.91

Ga naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: Zuiverheid: 99.73%
99.73

Celkweek, behandeling & werkconcentratie
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellijnen Assaytype Concentratie Incubatietijd Formulering Activiteitsbeschrijving PMID
Sf9 Function assay Inhibition of human recombinant SphK2 expressed in Sf9 cells assessed as radiolabeled products using 10 uM sphingosine and 10 uM gamma[32P]ATP by liquid scintillation counting, Ki=9.8μM 25643074
Sf9 Function assay 2 hrs Inhibition of recombinant human full-length N-terminal His-tagged SK2 expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells using NBD-Sph as substrate measured after 2 hrs by fluorescence based HPLC analysis, Ki=9.8μM 30889352
Klik om meer experimentele gegevens over de cellijn te bekijken

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Moleculair gewicht 380.91 Formule

C23H25ClN2O

 Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)
CAS-nr. 915385-81-8 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles C1C2CC3(CC1CC(C2)(C3)C(=O)NCC4=CC=NC=C4)C5=CC=C(C=C5)Cl

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 76 mg/mL (199.52 mM)
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Ethanol : 28 mg/mL

Water : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Moleculair gewicht
Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo
Batch:

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH2O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
SphK2
(Cell-free assay)
60 μM
In vitro
Opaganib (ABC294640) markedly alters the ratio of ceramide/S1P consistent with inhibition of SK activity in MDA-MB-231 cells. It inhibits tumor cell proliferation with IC50 values ranging from approximately 6 to 48 μM, and impairs tumor cell migration concomitant with loss of microfilaments. This compound induces nonapoptotic cell death, morphological changes in lysosomes, formation of autophagosomes, and increases in acidic vesicles in A-498, PC-3, and MDA-MB-231 cells. In both MCF-7 and ER-transfected HEK293 cells, it decreases E2-stimulated ERE-luciferase activity.
Kinase Assay
Sphingosine Kinase Assays
De IC50-waarden voor Opaganib (ABC294640) en DMS worden bepaald door een nieuw ontwikkelde HPLC-gebaseerde SK-activiteitsassay. Kort gezegd, de testverbindingen worden geïncubeerd met recombinant SK1 of SK2 en NBD-Sph in de isozym-selectieve assaybuffers zoals hieronder beschreven, met 1 mg/ml vetzuurvrij bovine serumalbumine, 100 μM ATP en 400 μM MgCl2. Het product, d.w.z. NBD-S1P, wordt gescheiden van NBD-Sph door HPLC als volgt: Waters 2795 HPLC-systeem met een Waters 2495 fluorescentiedetector, C8 Chromolith RP-8e kolom (100 × 4,6 mm), 1 ml/min mobiele fase (acetonitril/20 mM natriumfosfaatbuffer, pH 2,5, bij 45:55). Fluorescentie wordt gemeten met excitatie bij 465 nm en emissie bij 531 nm. De verhouding van NBD-S1P/(NBD-Sph + NBD-S1P) wordt gebruikt als maat voor de SK-activiteit. SK-isozym-selectieve assaybuffers bevatten elk 20 mM Tris, pH 7,4, 5 mM EDTA, 5 mM EGTA, 3 mM β-mercapto-ethanol, 5% glycerol, 1× protease-remmers en 1× fosfatase-remmers. Voor de SK1-assaybuffer wordt 0,25% (eindconcentratie) Triton X-100 toegevoegd; en voor de SK2-buffer wordt 1 M (eindconcentratie) KCl toegevoegd. Assays worden 2 uur bij kamertemperatuur uitgevoerd, waarna een 1,5 volume methanol wordt toegevoegd om de kinase-reactie te beëindigen. Na 10 minuten worden de monsters gecentrifugeerd bij 20.000 g om het neergeslagen eiwit af te pelletten, en de supernatanten worden geanalyseerd door HPLC. In experimenten om de Ki voor remming van SK2 door deze verbinding te bepalen, wordt het ADP Quest-assaysysteem gebruikt om de kinase-activiteit te meten in aanwezigheid van variërende concentraties sphingosine en de verbinding. Om de effecten van Opaganib op cellulaire SK-activiteit te bepalen, worden bijna-confluente MDA-MB-231-cellen 's nachts serum-verhongerd en vervolgens behandeld met variërende concentraties van de verbinding. De cellen worden vervolgens geïncubeerd met [3H]sphingosine bij een eindconcentratie van 1 μM. De cellen nemen de exogene sphingosine op, die wordt omgezet in S1P via SK-activiteit, en [3H]S1P wordt gescheiden van [3H]sphingosine door extractie en gekwantificeerd door scintillatietelling.
In vivo
Opaganib (ABC294640) significantly reduces tumor growth in mice bearing mammary adenocarcinoma xenografts, associated with depletion of S1P levels. In severe combined immunodeficient mice bearing A-498 xenografts, it delays tumor growth and elevates autophagy markers. This compound also protects against liver transplantation-induced inflammation and cross-talk between innate and adaptive immunities, major events precipitating and exacerbating graft injury, and improves liver function and survival.
Referenties
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22848628/

Toepassingen (Applications)

Methoden Biomarkers Afbeeldingen PMID
Western blot c-Myc pRb / Rb H3K9ac / p21 p-STAT3 / STAT3
S7174-WB1
27517489
Growth inhibition assay Cell proliferation
S7174-viability1
25122609

Informatie klinische proef (Clinical Trial Information)

(gegevens van https://clinicaltrials.gov, bijgewerkt op 2024-05-22)

NCT-nummer Rekrutering Aandoeningen Sponsor/Medewerkers Startdatum Fasen
NCT02939807 Withdrawn
Carcinoma Hepatocellular
Medical University of South Carolina|National Cancer Institute (NCI)|Apogee Biotechnology Corporation
 September 30 2019 Phase 2
NCT03377179 Completed
Cholangiocarcinoma|Cholangiocarcinoma Non-resectable|Cholangiocarcinoma Perihilar|Cholangiocarcinoma Extrahepatic|Cholangiocarcinoma Intrahepatic
RedHill Biopharma Limited
 March 7 2018 Phase 2
NCT02757326 Terminated
Multiple Myeloma
RedHill Biopharma Limited|Apogee Biotechnology Corporation|Duke University|National Cancer Institute (NCI)
 December 13 2016 Phase 1|Phase 2
NCT02229981 Withdrawn
Diffuse Large B Cell Lymphoma|Kaposi Sarcoma
RedHill Biopharma Limited|Louisiana State University Health Sciences Center in New Orleans|Apogee Biotechnology Corporation
 July 2014 Phase 1|Phase 2
NCT01488513 Completed
Pancreatic Cancer|Unspecified Adult Solid Tumor Protocol Specific
RedHill Biopharma Limited|Apogee Biotechnology Corporation|Medical University of South Carolina|FDA Office of Orphan Products Development|National Cancer Institute (NCI)
 August 2011 Phase 1