Azilsartan Angiotensin Receptor antagonist

A potent, orally active and specific AII receptor antagonist.

Azilsartan remt de specifieke binding van ¹²⁵I-Sar¹-Ile⁸-AII aan menselijke angiotensine type 1 receptoren. Deze verbinding remt ook de accumulatie van AII-geïnduceerd inositol 1-fosfaat (IP1) in de celgebaseerde assay met een IC50-waarde van 9,2 nM. In geïsoleerde konijnen aortastrips vermindert het de maximale contractiele respons op AII met een pD'2-waarde van 9,9. De remmende effecten van deze chemische stof op contractiele responsen geïnduceerd door AII blijven bestaan nadat de strips zijn gewassen. [1] Het onderdrukt de toename van de plasmaglucosespiegel in de orale glucosetolerantietest (OGTT) zonder significante verandering in insulineconcentratie en verbetert de insulinegevoeligheid. In de skeletspieren vermindert dit middel de expressie van TNF-α bij doses van 0,001%. In vetweefsel vermindert het de TNF-α-expressie, maar verhoogt het de expressie van adiponectine, PPARγ, C/EBα en aP2. [2] In gekweekte 3T3-L1 preadipocyten versterkt deze verbinding de adipogenese en oefent het grotere effecten uit dan valsartan op de expressie van genen die coderen voor peroxisoomproliferator-geactiveerde receptor-α (PPARα), PPARδ, leptine, adipsine en adiponectine. Het remt ook potent de proliferatie van vasculaire cellen in afwezigheid van exogeen gesupplementeerd angiotensine II. [3]

Radioligandbindingsstudies op menselijke AT1-receptoren

Een radioligandbindingsassay wordt uitgevoerd met behulp van humane AT1-receptor-gecoate microplaten die 4,4 tot 6,2 fmol receptoren/put bevatten (10 μg membraaneiwit/put). Membraan-gecoate putten worden geïncubeerd met 45 μL assaybuffer (50 mM Tris-HCl, 5 mM MgCl₂, 1 mM EDTA en 0,005% CHAPS, pH 7,4) met verschillende concentraties Azilsartan bij kamertemperatuur. Na 90 minuten wordt 5 μL ¹²⁵I-Sar¹-Ile⁸-AII (eindconcentratie 0,6 nM) opgelost in assaybuffer toegevoegd aan de putten, en de plaat wordt gedurende 5 uur geïncubeerd. Bij elke stap wordt de plaat kort en voorzichtig geschud op een plaatschudder. In uitwasexperimenten worden de membranen gedurende 90 minuten geïncubeerd met deze verbinding, vervolgens onmiddellijk tweemaal gewassen met 200 μL/put assaybuffer om ongebonden verbindingen te verwijderen, en verder geïncubeerd gedurende 5 uur met ¹²⁵I-Sar¹-Ile⁸-AII. Membraangebonden radioactiviteit wordt geteld met behulp van een TopCount Microplate Scintillatie- en Luminescentieteller. In de experimenten om de dissociatiesnelheid van deze chemische stof van AT1-receptoren te schatten, worden membranen gedurende 90 minuten geïncubeerd met deze verbinding in een concentratie van 30 nM voor deze verbinding. Deze verbinding remt de specifieke binding van ¹²⁵I-Sar¹-Ile⁸-AII aan menselijke AT1 met ongeveer 90%. De membranen worden vervolgens onmiddellijk tweemaal gewassen met 200 μL/put assaybuffer en verder geïncubeerd met ¹²⁵I-Sar¹-Ile⁸-AII gedurende 240 minuten. Membraangebonden radioactiviteit wordt geteld met behulp van de TopCount Microplate Scintillatie- en Luminescentieteller na 30 minuten, 60 minuten, 90 minuten, 120 minuten, 150 minuten, 180 minuten of 240 minuten. Niet-specifieke binding van ¹²⁵I-Sar¹-Ile⁸-AII wordt geschat in aanwezigheid van 10 μM ongelabelde AII. Ongelabelde AII wordt opnieuw toegevoegd na uitwassing voor het uitwasexperiment. Specifieke binding wordt gedefinieerd als totale binding minus niet-specifieke binding.

Bij Koletsky-ratten verlaagt Azilsartan-behandeling de bloeddruk, de basale plasmaglucoseconcentratie en de homeostasemodelbeoordeling van de insulineresistentie-index, en remt het de overmatige toename van plasma glucose- en insulineconcentraties tijdens de orale glucosetolerantietest. Deze verbinding reguleert de expressie van 11β-hydroxysteroïde dehydrogenase type 1 neerwaarts. [4]