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In Vivo (Ajoutez les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble. * Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre. * Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)
Préparation des solutions mères
Activité biologique
Description
UNC0638 est une sonde chimique puissante, sélective et pénétrant les cellules pour la Histone Methyltransferase G9a et GLP avec une IC50 de <15 nM et 19 nM, respectivement, et montre une sélectivité sur un large éventail de cibles Epigenetics et non-épigénétiques. Ce composé a des activités Antiviral.
Cibles
G9a (Cell-free assay)
GLP (Cell-free assay)
<15 nM
19 nM
In vitro
UNC0638 est une sonde chimique puissante, sélective et pénétrant les cellules pour G9a et GLP, avec un rapport toxicité/fonction >100, comparé à <6 pour BIX01294. Ce composé est un inhibiteur sélectif de G9a et GLP sur un large éventail de cibles épigénétiques et non-épigénétiques. Il est plus de 10 000 fois sélectif contre SET7/9 (une HMTase H3K4), SET8 (une HMTase H4K20), PRMT3 et SUV39H2. Dans les cellules MDA-MB-231, cette substance chimique (exposition de 48 h) réduit les niveaux de H3K9me2 de manière concentration-dépendante avec une IC50 de 81 nM. Son traitement d'une variété de lignées cellulaires entraîne des niveaux globaux de H3K9me2 plus faibles, équivalents aux niveaux observés pour le knockdown par petit ARN en épingle à cheveux de G9a et GLP, la puissance fonctionnelle de ce composé étant bien séparée de sa toxicité. Il réduit considérablement la clonogénicité des cellules MCF7, réduit l'abondance des marques H3K9me2 au niveau des promoteurs de gènes endogènes connus régulés par G9a et affecte de manière disproportionnée plusieurs loci génomiques codant des microARN. Dans les cellules souches embryonnaires de souris, cette sonde réactive les gènes silencieux par G9a et un gène rapporteur rétroviral de manière concentration-dépendante sans favoriser la différenciation.
In Vivo
Dans des études de métabolisme et de pharmacocinétique de médicaments chez la souris, UNC0638 a montré une clairance élevée, une demi-vie courte, un volume de distribution élevé et une faible exposition après administration intraveineuse, orale ou intrapéritonéale. Ainsi, bien que ce composé ne soit probablement pas adapté aux études animales in vivo en raison de faibles niveaux d'exposition, sa grande stabilité dans les conditions de dosage cellulaire, en combinaison avec une puissance et une sélectivité élevées, en fait un outil chimique idéal pour les études basées sur les cellules.
Ce dosage utilise la SAHH pour hydrolyser le produit de méthyltransférase S-adénosylhomocystéine en homocystéine et adénosine en présence d'adénosine désaminase qui convertit l'adénosine en inosine. La concentration d'homocystéine est ensuite déterminée par conjugaison de sa partie sulfhydryle libre à un fluorophore sensible aux thiols, le ThioGlo. Pour les déterminations d'IC50, les mélanges de dosage sont préparés dans un tampon phosphate de potassium 25 mM pH 7.5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl2, 0.01% Triton X 100 avec 5 μM SAHH, 0.3 U/mL d'adénosine désaminase, 25 μM SAM et 15 μM ThioGlo. G9a, EHMT1, SETD7, SETD8, PRMT3 et SUV39H2 sont dosés respectivement à 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 1 μM et 100 nM. UNC0638 est ajouté à des concentrations allant de 4 nM à 16 μM. Après 2 minutes d'incubation, les réactions sont initiées par addition des peptides d'histone : 10 μM H3(1-25) pour G9a, 20 μM H3(1-25) pour EHMT1, 100 μM H3(1-25) pour SETD7, 500 μM H4(1-24) pour SETD8, 10 μM H4(1-24) pour PRMT3 et 200 μM H3K9Me1 (1-15) pour SUV39H2. La réaction de méthylation est suivie en surveillant l'augmentation de la fluorescence à l'aide d'un lecteur de plaques Biotek Synergy2 avec un filtre d'excitation 360/40 nm et un filtre d'émission 528/20 nm pendant 20 minutes dans un format de plaque à 384 puits. Les valeurs d'activité sont corrigées en soustrayant le bruit de fond causé par le peptide ou la protéine. Les valeurs d'IC50 sont calculées à l'aide de Sigmaplot. Les écarts types sont calculés à partir de deux expériences indépendantes.
Approximately 5×105 cells were plated onto 75 cm2 flasks. MCF7 and U2OS cells were grown in Minimal Essential Media (MEM) without phenol red supplemented with Earl's salts, 10% FBS, 1 mM Pyruvate, 2 mM Glutamine, and 1×non-essential amino acids. H1299 cells were grown in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) with phenol red supplemented with 10% FBS and 1×Anti-Anti. At the time of cell plating, media was supplemented with 3 μM UNC638A or the equivalent DMSO vehicle. The media with 3 μM this compound but without any cells was also used as a control. All flasks were incubated at 37℃/5% CO2. After 65 hours, media was collected from the cells and centrifuged to remove any cell debris. The media (10 to 15 mL) from each of study groups was mixed with HPLC grade chloroform (7 to 12 mL). After the mixture was gently shaken, it was allowed to sit until the organic layer and the aqueous layer separated. The organic layer was collected, dried over anhydrous Na2SO4, and concentrated in vacuo. The resulting residue was dissolved in 100 μL of methanol and the solution was analyzed using an Agilent 6110 LC/MS Series system with UV detector set to at 254 nm. Samples were injected (10 μL) onto a Phenomenex Kinetex 2.1 x 100 nm, 2.6 μM, C18 column at room temperature and eluted with 72% B (MeCN) with A being H2O + 0.1% formic acid. The flow rate was 0.3 mL/min. No degradation products of this chemical were observed for any of treatment groups.
Coordinated repression of totipotency-associated gene loci by histone methyltransferase EHMT2 through binding to LINE-1 regulatory elements
[ bioRxiv, 2024, 2024.12.18.629181]
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