TPCA-1

Dans un essai de transfert d'énergie par résonance de fluorescence résolu dans le temps, le TPCA-1 inhibe l'activité de l'IKK-2 humaine avec une CI50 de 17,9 nM. De plus, ce composé s'avère être compétitif de l'ATP. Par ailleurs, il présente des valeurs de CI50 de 400 nM et 3600 nM contre IKK-1 et JNK3, respectivement. Ce produit chimique inhibe la production de TNF-α, d'IL-6 et d'IL-8 de manière concentration-dépendante, avec des valeurs de CI50 de 170, 290 et 320 nM, respectivement. [1] Il inhibe la prolifération des cellules de gliome, ainsi que la translocation nucléaire de RelA (p65) induite par le TNF et l'expression du gène IL8 dépendante de NFκB. Il est important de noter que ce composé inhibe l'expression génique induite par l'IFN, supprimant complètement l'expression des gènes MX1 et GBP1, tout en n'ayant qu'un effet mineur sur l'expression d'ISG15. [2]

L'administration prophylactique de TPCA-1 à 3, 10 ou 20 mg/kg, i.p., b.i.d., entraîne une réduction dose-dépendante de la gravité de l'arthrite murine induite par le collagène (CIA). La réduction significative de la gravité de la maladie et le retard de l'apparition de la maladie résultant de l'administration de ce composé à 10 mg/kg, i.p., b.i.d. sont comparables aux effets du médicament antirhumatismal, i.p., un jour sur deux. La localisation nucléaire de p65, ainsi que les niveaux d'IL-1beta, d'IL-6, de TNF-alpha et d'interféron-gamma, sont significativement réduits dans le tissu de la patte des souris traitées avec ce composé. De plus, l'administration de ce produit chimique in vivo entraîne une diminution significative de la prolifération des lymphocytes T induite par le collagène ex vivo. L'administration thérapeutique de ce composé à 20 mg/kg, mais pas à 3 ou 10 mg/kg, i.p., b.i.d., réduit significativement la gravité de la CIA. [1]

• Test IKK-2

  L'IKK-2 humaine recombinante (résidus 1-756) est exprimée dans le baculovirus sous forme de protéine de fusion étiquetée GST N-terminale, et son activité est évaluée à l'aide d'un essai de transfert d'énergie par résonance de fluorescence résolu dans le temps. En bref, l'IKK-2 (5 nM final) diluée dans un tampon d'essai (50 mM HEPES, 10 mM MgCl₂, 1 mM CHAPS, pH 7,4, avec 1 mM DTT et 0,01 % p/v de BSA) est ajoutée aux puits contenant diverses concentrations de ce composé ou de véhicule DMSO (3 % final). La réaction est initiée par l'ajout de substrat GST-IκBα (25 nM final)/ATP (1 μM final), dans un volume total de 30 μL. La réaction est incubée pendant 30 min à température ambiante, puis arrêtée par l'ajout de 15 μL d'EDTA 50 mM. Un réactif de détection (15 μL) dans un tampon (100 mM HEPES, pH 7,4, 150 mM NaCl et 0,1 % p/v de BSA) contenant l'anticorps monoclonal antiphosphosérine- IκBα-32/36 12C2, marqué avec un chélate d'europium W-1024, et un anticorps anti-GST marqué à l'allophycocyanine est ajouté, et la réaction est incubée pendant 60 min supplémentaires à température ambiante. Le degré de phosphorylation de la GST- IκBα est mesuré comme un rapport du signal de transfert d'énergie spécifique à 665 nm au signal d'europium de référence à 620 nm, à l'aide d'un lecteur de plaques Packard Discovery.

• Lignées cellulaires

  U87, MT330, SJ-G2, and GBM6 human glioma lines

• Concentrations

  0-50 μM

• Temps dincubation

  3 days

• Méthode

  Ten microliters of MTT from stock solution (10 mg/mL) is added to each well of 96-well plates containing glioma cells and incubated at 37 °C for 2–4 h. Oxidized MTT is solubilized by adding 100 μL of 10% sodium dodecyl sulfate (SDS) in 0.01 N HCL, and plates are incubated at 37 °C for 4 h in a humidified chamber. Plates are read at 570 nm on a plate reader.

• Modèles animaux

  Murine collagen-induced arthritis

• Dosages

  3, 10, or 20 mg/kg

• Administration

  Administered via i.p. or b.i.d.