CP-690550 (Tofacitinib) Citrate

N° de catalogueS5001 Lot:S500109

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Données techniques

Formule

C16H20N6O.C6H8O7
Poids moléculaire 504.49 N° CAS 540737-29-9
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (198.21 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In Vivo (Ajoutez les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Le citrate de Tofacitinib (CP-690550, Tasocitinib) est un nouvel inhibiteur de JAK avec des IC50 de 1 nM, 20 nM et 112 nM contre JAK3, JAK2 et JAK1, respectivement. Il possède également une activité Anti-infection.
Cibles
JAK3
(Cell-free assay)		 JAK2
(Cell-free assay)
1 nM 20 nM
In vitro Le citrate de Tofacitinib inhibe la prolifération des blastes de lymphocytes T humains médiée par l'IL-2 et l'expression de CD69 induite par l'IL-15 avec des IC50 de 11 nM et 48 nM, respectivement. Le citrate de Tofacitinib prévient la réaction lymphocytaire mixte avec une IC50 de 87 nM. Le traitement par le citrate de Tofacitinib de cellules murines FDCP-EpoR (Patersen–erythropoietin receptor), dépendantes d'un facteur et hébergeant le JAK2 humain sauvage ou V617F, conduit à la prévention de la prolifération cellulaire avec des IC50 de 2,1 µM et 0,25 µM, respectivement. Le citrate de Tofacitinib inhibe la phosphorylation de STAT1 et STAT3 induite par l'interleukine-6 avec des IC50 de 23 nM et 77 nM, respectivement. De plus, le citrate de Tofacitinib génère un effet pro-apoptotique significatif sur les cellules murines FDCP-EpoR portant JAK2VV617F, tandis qu'un effet moindre est observé pour les cellules portant le JAK2 de type sauvage. Cette activité est associée à l'inhibition de la phosphorylation des effecteurs de signalisation en aval clés dépendants de JAK2V617F, à savoir le transducteur de signal et activateur de la transcription (STAT)3, STAT5, et l'homologue de l'oncogène viral du thymome murin v-akt (AKT). De plus, le citrate de Tofacitinib prévient l'expression de CD69 induite par l'IL-15 dans les cellules NK et les cellules T CD8+ humaines et de singe cynomolgus in vitro.
In Vivo Le citrate de Tofacitinib diminue une réponse d'hypersensibilité de type retardé et prolonge la survie d'allogreffes cardiaques dans des modèles murins. De plus, le traitement par le citrate de Tofacitinib de progéniteurs érythroïdes expansés ex vivo de patients atteints de PV positifs pour JAK2V617F entraîne une activité antiproliférative spécifique (IC50 = 0,2 μM) et pro-apoptotique. En revanche, les progéniteurs expansés de contrôles sains sont moins sensibles au citrate de Tofacitinib en termes de prolifération (IC50 > 1,0 μM) et d'apoptose. Pendant 2 semaines de dosage de citrate de Tofacitinib à 10 et 30 mg/kg/jour, une diminution significative et dépendante du temps du nombre de cellules NK par rapport au traitement par véhicule est observée. Le nombre de cellules CD8+ à mémoire effectrice dans le groupe traité par le citrate de Tofacitinib est 55% inférieur à celui observé chez les animaux traités par véhicule.

Protocole (de référence)

Test kinase :

[1]
  • Tests enzymatiques

    Les tests de kinase JAK1, JAK2 et JAK3 utilisent une protéine exprimée dans des cellules SF9 infectées par le baculovirus (une protéine de fusion de GST et du domaine catalytique de l'enzyme JAK humaine) purifiée par chromatographie d'affinité sur glutathion-Sepharose. Le substrat pour la réaction est l'acide polyglutamique-tyrosine [PGT (4:1)], revêtu sur des plaques Nunc Maxi Sorp à 100 μg/mL pendant la nuit à 37 °C. Les plaques sont lavées trois fois et l'enzyme JAK est ajoutée aux puits, qui contiennent 100 μL de tampon de kinase (50 mM HEPES, pH 7,3, 125 mM NaCl, 24 mM MgCl2) + ATP + 1 mM d'orthovanadate de sodium. Pour le citrate de Tofacitinib, il est également ajouté pour le test de kinase à différentes doses. Après incubation à température ambiante pendant 30 min, les plaques sont lavées trois fois. Le niveau de tyrosine phosphorylée dans un puits donné est déterminé par un test ELISA standard utilisant un anticorps anti-phosphotyrosine.
Test cellulaire :

[2]
  • Lignées cellulaires

    FDCP-EpoR JAK2WT and JAK2V617F cell lines

  • Concentrations

    0-4 μM

  • Temps dincubation

    72 hours

  • Méthode

    Determination of growth inhibition by Tofacitinib citrate is performed using identical culture conditions for both FDCP-EpoR JAK2WT and JAK2V617F cell lines. Briefly, 1 × 105 cells/mL are cultured in 96-well flat-bottom plates at 37 °C in a humidified 5% CO2 atmosphere using RPMI 1640 supplemented with 1.25% FCS, and 5% WEHI supernatant. Decreased FCS concentration is necessary to prevent binding between Tofacitinib citrate and serum proteins. Growth inhibition assays are terminated by addition of 20 μL CellTiter96 One Solution Reagent. Flat-bottom plates are incubated for an additional 3 hours for MTT assay. Absorbance is determined at 595 nm on a BioTek Synergy-HT microplate reader. Results are the average standard deviation of three independent determinations.
Étude animale :

[2]
  • Modèles animaux

    Mauritius-origin adult cynomolgus monkeys

  • Dosages

    10, 30 mg/kg/d

  • Administration

    Oral gavage

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21105711/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18482053/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15371489/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14593182/

Validation du produit par le client

<p>CP-690550 reduced the severity of ischemic damage. (A) CP-690550 (10 μM) suppressed IL-17 production by cdT cells and activated memory T cells. cdT cells and CD4+ CD44+ memory T cells isolated from C5BL6J mice through flow cytometry were stimulated for 24 h with plate-bound monoclonal antibodies to CD3 (2 ng/ml) and CD28 (1 ng/ml) in the presence or absence of IL-23 (25 ng/ml). IL-17A production and IL-17A expression level were measured by quantitative RT-PCR (a) and ELISA (b). (B) CBF reduction after brain ischemia. (C) Time-dependent changes in neurological score. *p < 0.05. (D) Infarct volume as visualized through TTC staining on day 3 in CP-690550 (CP)- and vehicle-treated mice.</p><div><div> </div></div><p> </p>

Données de [ Biochem Biophy Res Commun , 2010 , 402, 500–506 ]

<p>CP690,550 is effective in treating collagen-induced arthritis in vivo. 6-week-old DBA/J1 male mice were given an initial injection of type 2 collagen on day 21 and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15mg/kg/day) was administered interperitoneally once daily for 2 weeks from day 0 (n = 4 per group). Tissue specimens from the ankle of CIA mice administered vehicle or CP690,550 were stained with safranin O and methyl green. Bar, 100 μM. Representatives of at least two independent experiments are shown.</p>

, , Dr. Akihiko Yoshimura of Akihiko Yoshimura

<p>STAT3-inhibition antagonizes arthritis effects in vivo. (A) 6-week-old DBA/J1 male mice were given initial injection of type 2 collagen on day -21, and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15mg/kg/day) was administered intraperitoneally once daily for 2 weeks from day 7 (n = 4per group). Arthritis scores were measured three times a week. (B) Total RNA was prepared from the tissue of hind paws of CIA induced mice after 2 weeks of treatment by vehicle or CP690,550, and expression of IL-6 cytokine families (IL-6, OSM, IL-11 and LIF) relative to β-actin was analyzed by a quantitative real-time PCR. (C) IL 6 serum levels in sera of CIA induced mice after 2 weeks of treatment by vehicle or CP690,550 were assessed by ELISA. (D) Specimens of ankle joints from CIA mice treated with vehicle or CP690,550 for 2 weeks were subjected to immunofluorescence staining for pSTAT3. Nuclei were visualized by TOTO3. Bar, 100 μm. (E) Whole cell lysates were made from ankle joint tissues of CIA mice treated with or without CP690,550 for 2 weeks. Phosphorylated-STAT3 was then analyzed by western blot (upper panel) and ELISA (lower panel). Results are representative of at least three independent experiments.</p>

, , Saraswati Sukumar of Johns Hopkins University School of Medicine

<p>The STAT3 inhibitor CP690,550 inhibits arthritis in vivo and the expression of IL-6 cytokine family in vitro. (A) Whole-cell lysates from MC3T3-E1 cells stimulated with IL-1β (10 ng/ml) plus CP690,550 at the indicated concentrations were analyzed by immunoblotting to detect pSTAT3 and STAT3. Actin served as an internal control. (B) 6-week-old DBA/1 male mice were given an initial injection of type 2 collagen on day -21, and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15 mg/kg/day) was administered intraperitoneally once daily for 2 weeks from day 0 (n = 4 per group). Arthritis scores were measured three times a week. (C and D) Total RNA was prepared from primary osteoblasts treated with IL-1β (10ng/ml), TNFα (10 ng/ml) or OSM (50 ng/ml) with (+) or without (-) CP690,550 (100nM) for 24 hours, and IL-6 expression relative to β-actin was analyzed by quantitative real-time PCR. Data are means ±SD of IL-6/β-actin. (*P < 0.001; n = 3). (E) IL-6 protein levels in the supernatant of osteoblasts treated with IL-1β (left panel) or TNF (right panel) plus indicated concentrations of CP690,550 for 24 hours were assessed by ELISA. Data are means ±SD of IL-6 (pg/ml).</p>

, , Dr. Akihiko Yoshimura of Akihiko Yoshimura

De Selleck CP-690550 (Tofacitinib) Citrate A été cité par 198 Publications

Unveiling the Anti-Angiogenic Potential of Small-Molecule (Kinase) Inhibitors for Application in Rheumatoid Arthritis [ Cells, 2025, 14(2)102] PubMed: 39851530
Pharmacological evaluation of drug therapies in Aicardi-Goutières syndrome: insights from patient-derived neural stem cells [ Front Pharmacol, 2025, 16:1549183] PubMed: 40183101
JAK/STAT3 represents a therapeutic target for colorectal cancer patients with stromal-rich tumors [ J Exp Clin Cancer Res, 2024, 43(1):64] PubMed: 38424636
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
A panel of janus kinase inhibitors identified with anti-inflammatory effects protect mice from lethal influenza virus infection [ Antimicrob Agents Chemother, 2024, 68(4):e0135023.] PubMed: 38470034
Tofacitinib to prevent anti-drug antibody formation against LMB-100 immunotoxin in patients with advanced mesothelin-expressing cancers [ Front Oncol, 2024, 14:1386190] PubMed: 38706610
Metabolic signature and proteasome activity controls synovial migration of CDC42hiCD14+ cells in rheumatoid arthritis [ Front Immunol, 2023, 14:1187093] PubMed: 37662900
Comprehensive protocols for culturing and molecular biological analysis of IBD patient-derived colon epithelial organoids [ Front Immunol, 2023, 14:1097383] PubMed: 36911731
In vitro and in vivo modelling of mutant JAK3/STAT5 signaling in leukemia [ Heliyon, 2023, 9(11):e22085] PubMed: 38053908
Cap analysis of gene expression (CAGE) 法を用いた nestin-induced Ikk2 deficient マウスにおける皮膚炎の分子病態解析 [ University of Toyama Graduate School of Medical and Pharmaceutical Education (Doctoral Course), 2023, ] PubMed: none

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