Tanespimycin (17-AAG)

La Tanespimycin (17-AAG), un analogue de la geldanamycine, présente une affinité de liaison plus de 100 fois supérieure pour Hsp90 dérivée de cellules cancéreuses surexprimant HER-2 (BT474, N87, SKOV3 et SKBR3) ou de cellules de carcinome mammaire BT474 avec des valeurs d'IC50 de 5-6 nM. [1] Ce composé provoque la dégradation de HER2, HER3, Akt, et des récepteurs aux androgènes (AR) mutants et de type sauvage, entraînant l'arrêt de la croissance G1 dépendante de RB des cellules de cancer de la prostate telles que LNCaP, LAPC-4, DU-145 et PC-3 avec des valeurs d'IC50 de 25-45 nM. [2] En plus d'induire l'apoptosis des cellules Ba/F3 transformées avec le BCR-ABL de type sauvage avec un IC50 de 5,2 M, il a la capacité d'induire l'apoptosis des cellules transformées avec les mutants T315I et E255K BCR-ABL avec des valeurs d'IC50 de 2,3 M et 1,0 M, respectivement, en induisant la dégradation de la protéine BCR-ABL de type sauvage et des mutants. [3]

La Tanespimycin (17-AAG) présente une affinité de liaison significativement plus élevée pour Hsp90 provenant de xénogreffes 3T3-src, B16 ou CT26 chez des souris nues avec des valeurs d'IC50 de 8-35 nM, comparativement à celle des tissus normaux avec des valeurs d'IC50 de 200-600 nM. [1] L'administration de ce composé (~50 mg/kg) entraîne une diminution significative de l'expression d'AR, HER2, HER3 et Akt de manière dose-dépendante avec une diminution >50% à une dose de 50 mg/kg, ce qui se traduit par une inhibition dose-dépendante de la croissance des xénogreffes de cancer de la prostate dépendantes des androgènes (CWR22) et indépendantes (CWR22R et CWRSA6) de 67%, 80% et 68% à une dose de 50 mg/kg, respectivement. [2]

• Tests de liaison Hsp90

  La protéine Hsp90 native purifiée ou les lysats cellulaires de cellules cancéreuses surexprimant HER-2 (BT474, N87, SKOV3 et SKBR3) ou de cellules de carcinome mammaire BT474 dans un tampon de lyse (20 mM HEPES, pH 7,3, 1 mM EDTA, 5 mM MgCl₂, 100 mM KCl) sont incubés avec diverses concentrations de Tanespimycin (17-AAG) pendant 30 minutes à 4 °C, puis incubés avec de la biotine-GM liée à des billes magnétiques de streptavidine BioMag pendant 1 heure à 4 °C. Les tubes sont placés sur un support magnétique et le surnageant non lié est retiré. Les billes magnétiques sont lavées trois fois dans un tampon de lyse et chauffées pendant 5 minutes à 95 °C dans un tampon d'échantillon SDS-PAGE. Les échantillons sont analysés sur des gels de protéines SDS, et des western blots sont effectués à l'aide des anticorps indiqués. Les bandes des western blots sont quantifiées à l'aide du Bio-rad Fluor-S MultiImager, et le pourcentage d'inhibition de la liaison de Hsp90 à la biotine-GM est calculé. L'IC50 rapporté est la concentration de ce composé nécessaire pour provoquer une inhibition à moitié maximale de la liaison.

• Lignées cellulaires

  BT474, SKBR3, N87, SKOV3, MCF7, MDA468, Hs578T, Hs578Bst, A549, HT29, U87, SKMG3, HT1080, RPTEC, NDF, HMVEC, HMEC, HUVEC, and PBMC cells

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Temps dincubation

  5 days

• Méthode

  Cells are seeded in 96-well plates at 2,000 cells per well in a final culture volume of 100 μL for 24 hours before the addition of increasing concentrations of Tanespimycin (17-AAG), which is incubated for 5 days. Viable cell number is determined using the Celltiter 96 AQueous Nonradioactive Cell Proliferation Assay. The value of the background absorbance at 490 nm (A₄₉₀) of wells not containing cells is subtracted. Percentage of viable cells = (A₄₉₀ of this compound treated sample/A₄₉₀ untreated cells) × 100. The IC50 is defined as the concentration that gave rise to 50% viable cell number.

• Modèles animaux

  Male nu/nu athymic mice inoculated s.c. with androgen-dependent CWR22 xenograft, and female nu/nu athymic mice inoculated s.c. with androgen-independent xenografts CWR22R and CWRSA6

• Dosages

  ~50 mg/kg

• Administration

  Injection i.p.