SNX-2112

Le traitement des cellules BT-474 avec 1 µM de SNX-2112 entraîne une régulation négative de l'expression de HER2 dans les 3 à 6 heures suivant l'exposition au médicament, avec une perte quasi complète de l'expression de HER2 en 10 heures. Le traitement avec ce composé entraîne également une diminution de l'expression totale d'Akt. Il inhibe la prolifération cellulaire avec des valeurs d'IC50 allant de 10 à 50 nM, dans les cellules cancéreuses BT474, SKBR-3, SKOV-3, MDA-468, MCF-7 et H1650. Et ces effets antiprolifératifs sont associés à une hypophosphorylation de Rb, à un arrêt de la phase G1 et à des niveaux modestes d'apoptose. [1] Ce produit chimique se lie de manière compétitive au site de liaison de l'adénosine triphosphate N-terminal de Hsp90. Il induit l'apoptose via le clivage des caspases-8, -9, -3 et de la poly (ADP-ribose) polymérase. Le composé inhibe l'activation de l'Akt induite par les cytokines et de la kinase régulée par le signal extracellulaire (ERK) et surmonte également les avantages de croissance conférés par l'interleukine-6, le facteur de croissance analogue à l'insuline-1 et les cellules stromales de la moelle osseuse. Il inhibe la formation de tubes par les cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine via l'abrogation de la voie eNOS/Akt et inhibe fortement la formation d'ostéoclastes via la régulation négative d'ERK/c-fos et PU.1. [2] Les lignées cellulaires (huit lignées cellulaires provenant d'ostéosarcome, de neuroblastome, d'hépatoblastome et de lymphome) étudiées démontrent une sensibilité à cet agent avec des valeurs d'IC50 allant de 10 à 100 nM. Une dose plus élevée (70 nM) présente une inhibition plus prolongée et une accumulation sub-G1 plus importante. Les niveaux observés d'Akt1 et de C-Raf sont nettement réduits au fil du temps, avec une augmentation du clivage de PARP. [3] Une recherche récente indique que ce composé induit l'autophagie de manière dépendante du temps et de la dose via l'inhibition d'Akt/mTOR/p70S6K. Il induit une apoptose et une autophagie significatives dans les cellules de mélanome humain A-375, et pourrait être un agent thérapeutique ciblé efficace. [4]

SNX-2112 est un métabolite actif des composés SNX-5542, qui inhibe la croissance des cellules du myélome multiple (MM) et prolonge la survie dans un modèle murin de xénogreffe. Le blocage de HSP90 par ce composé n'inhibe pas seulement la croissance des cellules MM, mais agit également dans le microenvironnement médullaire pour bloquer l'angiogenèse et l'ostéoclastogenèse. [2]

• Essai de déplacement d'ATP

  Pour l'essai de déplacement par affinité protéique, une résine d'affinité à base de purine est générée en incubant du Sépharose lié à l'ATP avec un lysat de cellules Jurkat (congelé rapidement et homogénéisé dans du sérum physiologique) à 4 °C. Ceci est ensuite incubé avec SNX-2112 pendant 90 minutes. Les protéines éluées par ce composé sont ensuite séparées par SDS-PAGE, visualisées par coloration argentique et excisées du gel pour une identification basée sur la spectrométrie de masse. En bref, après décoloration et digestion à la trypsine, les peptides sont extraits avec des μC18 ZipTips, puis élués et déposés directement sur une cible conventionnelle en acier inoxydable pour MALDI avec une solution saturée d'acide α-cyano-4-hydroxycinnamique dans 50 % d'acétonitrile, 0,15 % d'acide formique. Les spectres de masse sont ensuite acquis à l'aide d'un analyseur de protéomique MALDI-TOF/TOF 4700. Les spectres MS sont acquis (1 000 tirs par spectre), et les trois pics de chaque avec le rapport signal/bruit le plus élevé sont automatiquement soumis à une analyse MS en tandem (3 000 tirs par spectre). L'énergie de collision est de 1 keV. L'air est utilisé comme gaz de collision. L'identification des protéines est effectuée à partir des données MS et MS en tandem à l'aide du logiciel GPS Explorer avec le moteur de recherche de base de données Mascot intégré.

• Lignées cellulaires

  BT474, SKBR-3, SKOV-3, MDA-468, MCF-7 and H1650 cancer cells

• Concentrations

  0-500 nM

• Temps dincubation

  24 hours

• Méthode

  Cell viability is determined by seeding 2-5 × 10³ cells per well in 96- well plates and treating with SNX-2112 24 hours after plating in complete medium (200 μL). Each drug concentration is tested in eight wells. Cells are assayed using the Alamar blue viability test after a 96-h incubation. Flow cytometry is done using nuclei stained with ethidium bromide and isolated via the Nusse protocol

• Modèles animaux

  5 × 10⁶ MM.1S cells are inoculated subcutaneously in the Fox Chase SCID mice (6-7 weeks old).

• Dosages

  20 or 40 mg/kg

• Administration

  SNX-5422 is administered orally 3 times per week, total 3 weeks.