Seletalisib (UCB-5857)

Le Seletalisib (UCB-5857) est un inhibiteur puissant, compétitif de l'ATP et sélectif de la PI3Kδ capable de bloquer la phosphorylation de la protéine kinase B (AKT) suite à l'activation du récepteur des cellules B dans une lignée de cellules B. De plus, il a inhibé la libération de superoxyde stimulée par le peptide N-formyl, mais pas celle stimulée par le myristate de phorbol acétate, par les neutrophiles humains, ce qui est cohérent avec une activité spécifique de la PI3Kδ. Les résultats des tests cellulaires d'immunité adaptative ont démontré que ce composé bloque la production de plusieurs cytokines par les cellules T humaines activées. De plus, il a inhibé la prolifération des cellules B et la libération de cytokines. Dans les tests sur le sang total humain, l'inhibiteur a supprimé l'expression de CD69 lors de l'activation des cellules B et la dégranulation des basophiles médiatisée par l'anti-IgE. Parmi les 239 kinases criblées, le seletalisib à une concentration de 10 μM n'a montré aucune activité inhibitrice supérieure à 47% (MAP4K4) contre les enzymes kinases non-PI3K. Contre les enzymes non-kinases, il a montré de faibles activités contre la phosphodiestérase (PDE)3A, la PDE2A1 et la PDE4D2, avec une inhibition variant entre 32 et 74% à 10 μM. Lors d'un criblage à une concentration de 10 μM contre 55 récepteurs et canaux ioniques, l'activité inhibitrice la plus élevée observée était de 20%. Un récepteur, le récepteur du neuropeptide Y (Y1), a montré 54% d'activation. Les essais de liaison aux récepteurs in vitro et les essais enzymatiques sur un large éventail de classes de cibles ont montré qu'il est sélectif pour la PI3Kδ. Le composé a puissamment inhibé la phosphorylation d'AKT après stimulation de l'anti-IgM du BCR sur les cellules Ramos avec une IC50 de 15 nM[1]. Lors de son profilage dans un large éventail de systèmes d'essais de cellules primaires, y compris les fibroblastes, les cellules épithéliales, endothéliales et musculaires lisses vasculaires, il n'a montré une activité significative que dans les systèmes contenant des lymphocytes, démontrant sa sélectivité fonctionnelle envers les cellules exprimant la PI3Kδ[2].

Le Seletalisib (UCB-5857) montre une inhibition dose-dépendante dans un modèle in vivo de rat de libération d'interleukine 2 induite par un anticorps anti-CD3. L'analyse de la relation entre l'inhibition de la libération d'IL-2 et sa concentration sanguine, en utilisant des données combinées de plusieurs expériences, a démontré que ce composé a des effets in vivo puissants avec une valeur IC50 estimée à <10 nM[1]. Dans les études de première administration chez l'homme, les profils moyens de concentration plasmatique-temps ont augmenté avec l'augmentation de la dose après une administration unique et multiple, sans déviations majeures de la proportionnalité de la dose. Il n'y a pas eu d'accumulation inattendue ou de perte d'exposition après des administrations multiples (profil pharmacocinétique (PK) indépendant du temps) et les valeurs de t1/2 apparentes (environ 20h) ont soutenu une administration une fois par jour[2].

• Essais d'activité kinase in vitro et profilage hors cible

  Les activités du seletalisib (UCB-5857) et de l'inhibiteur pan-PI3K UCB1370037 ont été testées dans des essais biochimiques de kinase des isoformes PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kδ et PI3Kγ (fabriquées en interne). Des essais de transfert d'énergie par résonance de fluorescence (FRET) résolus dans le temps (TR) compétitifs utilisant un kit de réactifs d'essai PI3K en quatre étapes ont été réalisés. Dans cet essai, l'activité de la PI3K est mesurée par la détection du phosphatidylinositol triphosphate (PIP3) comme suit : un complexe est formé entre le PIP3 biotinylé et une protéine de domaine d'homologie de pleckstrine (PH) marquée à la glutathion S-transférase (GST), qui sont détectés respectivement par la streptavidine-allophycocyanine (APC) et l'anticorps anti-GST marqué à l'europium. La proximité des deux fluorophores entraîne un signal TR-FRET stable. La production de PIP3 non marqué par la PI3K dans la réaction kinase entraîne une inhibition compétitive du complexe et donc du signal FRET. En bref, 2 μl du composé ont été ajoutés aux puits contenant 8 μl d'un mélange contenant du substrat de phosphatidylinositol bisphosphate (PIP2) et de l'ATP, avant l'ajout de 10 μl de PI3K (prédiluée à la concentration requise). Les concentrations finales d'ATP et de substrat PIP2 étaient respectivement de 2 μM et 10 μM. La concentration finale des enzymes PI3K était de 1 à 8 nM selon l'activité du lot. La concentration finale de DMSO était de 2,0%. La plaque a été incubée à température ambiante pendant 30 minutes avant l'ajout du tampon d'arrêt et du tampon de détection selon les instructions du fabricant, puis la plaque a été incubée pendant 6 heures supplémentaires à température ambiante. Les mesures TR-FRET ont été réalisées sur un lecteur de plaques Analyst GT. La dépendance de l'activité de ce composé vis-à-vis de la concentration d'ATP contre PI3Kδ a été établie en réalisant l'essai en présence de concentrations d'ATP variables (2, 40, 200 et 1000 μM). Les concentrations finales de PI3Kδ et du substrat PIP2 dans ces essais étaient respectivement de 1 nM et 25 μM.

• Lignées cellulaires

  Ramos B-cell line

• Concentrations

  0.1 nM-10 μM

• Temps dincubation

  10 min

• Méthode

  Serially diluted seletalisib (UCB-5857) and goat anti-human F(ab)2 IgM in serum-free RPMI 1640 were added to Ramos cells plated in serum-free RPMI 1640. The plate was incubated for 10 minutes, chilled on ice, and the cells pelleted by centrifugation. Cellular phosphorylated AKT was detected by MSD assay.

• Modèles animaux

  Adult Lewis rats (male, 6-8 weeks of age)

• Dosages

  0.1-10 mg/kg in 500 μl volume

• Administration

  via oral gavage