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Le SB1317/TG02 inhibe la prolifération de toutes les lignées cellulaires testées, y compris les lignées cellulaires de tumeurs solides telles que le côlon (HCT-116, COLO205) et la prostate (DU145) avec des IC50 de 33 nM, 72 nM et 140 nM, respectivement. Le SB1317/TG02 inhibe puissamment le biomarqueur CDK2 pRb (phospho-Rb, protéine suppresseur de tumeur du rétinoblastome) dans HCT-116, et des effets peuvent être détectés à 40 nM, la phosphorylation des protéines étant complètement inhibée à 200 nM. Le SB1317/TG02 est puissant contre pRb dans les cellules MV4-11 avec une IC50 de 0,13 μM et inhibe également pFLT3 et pSTAT5 dans la même lignée cellulaire. Le SB1317/TG02 entraîne une perméabilité (Papp) de 26h dans la direction apicale à basolatérale (Papp,A B) et dans la direction basolatérale à apicale (Papp,B A) de 28,0 10^-6 cm/s et 27,4 10^-6 cm/s, respectivement, dans les essais de perméabilité bidirectionnelle Caco-2. Le SB1317/TG02 est stable avec une demi-vie de 45 min dans les microsomes hépatiques humains (HLM), est modérément stable dans le DLM (t_1/2 = 33 min), et est assez rapidement éliminé dans le MLM (t_1/22 = 12 min) et dans le RLM (t_1/2 = 11 min). [1] Le TG02 inhibe le plus puissamment les isoformes de CDK, inhibe CDK1, CDK2, CDK3, CDK5 et CDK9 avec des IC50 de 9 nM, 5 nM, 8 nM, 4 nM et 3 nM, respectivement. Le TG02 inhibe également Lck, TYK2, Fyn, JAK2 et FLT3 avec des IC50 de 11 nM, 14 nM, 15 nM, 19 nM et 19 nM, respectivement. Le TG02 a des effets anti-prolifératifs plus puissants que le SNS-032 dans les lignées cellulaires tumorales. Le TG02 montre une inhibition plus forte du panel de tumeurs liquides avec une IC50 de 0,13 M comparé au panel de tumeurs solides avec une IC50 de 0,30 M. Le TG02 (100 nM) induit un arrêt du cycle cellulaire et une apoptose dans les cellules MV4-11. Le TG02 inhibe pRb, pFLT3 et pSTAT5 avec des IC50 de 125 nM, 4,7 M et 560 nM, respectivement, dans les cellules MV4-11. Le TG02 inhibe pJAK2 (Y1007/8) et pSTAT3 avec des IC50 de 63 nM et 53 nM, respectivement, dans Karpas 1106P. L'exposition au TG02 (300 nM) entraîne une inhibition de CDK9, suivie d'un arrêt de la phase G1 et d'une induction apoptotique, dans les cellules HL-60. [2]

Le SB1317/TG02 est fortement lié aux protéines plasmatiques dans le plasma humain, de souris et de chien avec une liaison protéique plasmatique (PPB) variant entre 99,4% et 99,9%. Le SB1317/TG02 présente une biodisponibilité orale (F) de 4% et 37% chez les rats et les chiens, respectivement. Le SB1317/TG02 (75 mg/kg, par voie orale) montre une absorption rapide (t_max = 0,5 h) et une Cmax et une AUC moyennes de 1029 ng/mL et 2523 ng•h/mL, respectivement, avec une demi-vie terminale moyenne de 6,1 heures et une biodisponibilité orale de 24% chez les souris. Le SB1317/TG02 (75 mg/kg po q.d. 3 /semaine) inhibe significativement la croissance des tumeurs avec un TGI moyen de 82% dans un modèle xénogreffe sc murin de cancer colorectal humain (HCT-116), tandis que la dose plus faible de 50 mg/kg po 3 /semaine est marginalement efficace. Le SB1317/TG02 (75 mg/kg po, 15 mg/kg ip) inhibe significativement la croissance des tumeurs avec des TGI moyens de 42% et 63% pour les méthodes d'administration orale et ip, respectivement, dans un modèle xénogreffe sc murin de lymphome à cellules B humaines (Ramos). [1] Le TG02 (60 mg/kg) est sélectivement retenu à des niveaux supra-thérapeutiques et inhibe efficacement CDK2, CDK9 et FLT3 in vivo, provoquant l'apoptose dans les tissus tumoraux, dans les tissus tumoraux chez les souris nues porteuses de tumeurs MV4-11. Le TG02 (10 mg/kg, 20 mg/kg et 40 mg/kg) entraîne une inhibition de la croissance tumorale de 53%, 61% et 113%, respectivement, chez les souris nues porteuses de tumeurs MV4-11. [2]

• Essais enzymatiques

  Tous les essais sont réalisés dans des microplaques blanches de 384 puits en utilisant le système d'essai PKLight. TG02 est testé à huit concentrations préparées à partir de dilutions en série de 3 ou 4 fois, en commençant à 10 M. Pour l'essai CDK2/cycline A, le mélange réactionnel est composé des éléments suivants dans 25 M de tampon d'essai (50 mM Hepes, pH 7,5, 10 mM MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 5 mM BGP, 1 mM DTT, 0,1 mM orthovanadate de sodium), 1,4 M/mL de complexe CDK2/cycline A, 0,5 M de substrat RbING et 0,5 M d'ATP. Le mélange est incubé à température ambiante pendant 2 heures. Ensuite, 13 M de réactif de détection d'ATP PKLight sont ajoutés et le mélange est incubé pendant 10 min. Les signaux de luminescence sont détectés sur un lecteur de plaques multi-étiquettes. Les autres essais de kinase sont similaires, avec les différences suivantes dans les réactifs : Pour les essais FLT3, le mélange contient 2,0 M/mL d'enzyme FLT3, 5 M de substrat poly(Glu,Tyr) et 4 M d'ATP. Pour les essais JAK2, la réaction contient 0,35 M/mL d'enzyme JAK2, 10 M de substrat poly(Glu,Ala,Tyr) et 0,15 M d'ATP. Le logiciel d'analyse Prism 5.0 est utilisé pour générer les valeurs d'IC50 à partir des données.

• Lignées cellulaires

  HCT-116, COLO205 and DU145 cell lines

• Concentrations

  ~10 μM

• Temps dincubation

  48 hours

• Méthode

  For proliferation assays in 96-well plates, 2×10⁵ cells are seeded in 100 μL of medium and treated the following day with TG02 (in triplicate) at concentrations up to 10 μM for 48 hours. Cell viability is monitored using the CellTiter-96 Aqueous One solution cell proliferation assay. Dose-response curves are plotted to determine IC50 values for TG02 using the XL-fit software.

• Modèles animaux

  Murine sc xenograft model of human colon cancer (HCT-116)

• Dosages

  75 mg/kg

• Administration

  orally