SB505124

Le SB505124 est identifié comme un inhibiteur d'ALK réversible, compétitif de l'ATP et sélectif des ALK4 et ALK5. Ce composé ne présente aucune toxicité pour les cellules épithéliales rénales A498 à des concentrations allant jusqu'à 100 µM pendant 48 heures, et bloque l'apoptose induite par le TGF-β des cellules FaO et des cellules NRP 154 de manière dépendante de la concentration. [1] Dans les cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVEC), ce produit chimique (500 nM) bloque les changements du TGF-β1 sur l'assemblage de l'actine F et prévient la production de ROS induite par le TGF-β. [2] En inhibant la signalisation TGF-beta1, il conduit à une diminution de la neurogenèse induite par le (DFO). [3] Une étude récente montre que cet inhibiteur supprime la migration et l'invasion des cellules de cancer du sein MCF-7-M5. [4]

Dans un modèle de GFS de lapin, le SB505124 a diminué les niveaux de pression intraoculaire (PIO) et réduit l'infiltration cellulaire sous-conjonctivale et la cicatrisation au site chirurgical dans le GFS. [5] Chez les souris traitées au (TAC) et les souris KO FK12EC, ce composé prévient l'activation des récepteurs endothéliaux du TGF-β et l'induction de l'hyalinose artériolaire rénale. [6]

• Essai de protéine kinase in vitro

  Les essais de kinase sont réalisés comme décrit par Laping et al., 2002 en utilisant le domaine kinase d'ALK5 et le GST-Smad3 fusionné à l'extrémité N-terminale. Les essais de kinase sont effectués avec 65 nM de GST-ALK5 et 184 nM de GST-Smad3 dans 50 mM HEPES, 5 mM MgCl₂, 1 mM CaCl₂, 1 mM dithiothréitol et 3 μM ATP. Les réactions sont incubées avec 0,5 μCi de [³³P]γATP pendant 3 heures à 30 °C. La protéine phosphorylée est capturée sur du papier P-81, lavée avec de l'acide phosphorique à 0,5 % et comptée par scintillation liquide. Alternativement, la protéine Smad3 ou Smad1 est également enrobée sur des microplaques stériles basiques FlashPlate. Les essais de kinase sont ensuite effectués dans des FlashPlates avec les mêmes conditions d'essai en utilisant soit le domaine kinase d'ALK5 avec Smad3 comme substrat, soit le domaine kinase d'ALK6 (récepteur de BMP) avec Smad1 comme substrat. Les plaques sont lavées trois fois avec un tampon phosphate et comptées par TopCount.

• Lignées cellulaires

  A498, FaO and NRP 154 cells

• Concentrations

  0-10 μM

• Temps dincubation

  48 hours

• Méthode

  Cell viability is measured as described by Laping et al., 2002 or by using the modified tetrazolium salt WST-1. XTT assay: The cells are serum-deprived for 24 hours and then treated with SB505124 for 48 hours to assess the cellular toxicity. Cell viability is determined by incubating cells for 4 hours with XTT labeling and electron coupling reagent according to the manufacturer's directions. Live cells with active mitochondria produce an orange-colored product, formazan, which is detected using a plate reader at between A450 nm and A500 nm with a reference wavelength greater than 600 nm. The absorbance values correlate with the number of viable cells. Modified tetrazolium salt WST-1: Approximately 2000 cells are seeded in 96-well dishes in 100 μL of 0.2% FBS phenol red-free media overnight. The cells are treated with 50 μL of this compound (to achieve the final concentrations indicated) for 30 minutes before being treated with or without TGF-β1 and TNF-α to a final volume of 200 μL. Cell growth is measured at the indicated time points by incubating each well with 10 μL of WST-1 for 3 hours at 37 °C. Metabolically active cells cleave WST-1 to water-soluble formazan, which is directly quantitated with an enzyme-linked immunosorbent assay plate reader. Each experiment is done at least twice, and treatment for each cell line is done in triplicate.

• Modèles animaux

  New Zealand White (NZW) rabbits after glaucoma filtration surgery (GFS).

• Dosages

  Tablets containing 5 mg of SB505124.

• Administration

  Administered via p.o.