PR-619

PR-619 est un inhibiteur de DUB à large spectre de la classe des pyridinamides, perméable aux cellules, dont les cibles connues incluent ATXN3, BAP1, JOSD2, OTUD5, UCH-L1, UCH-L3, UCH-L5/UCH37, USP1, 2, 4, 5, 7, 8, 9X, 10, 14, 15, 16, 19, 20, 22, 24, 28, 47, 48, VCIP135, YOD1, ainsi que la déISGylase PLpro, la déNEDDylase DEN1 et la déSUMOlyase SENP6. Il a été démontré que ce composé augmente la polyubiquitination globale des protéines dans les cellules HEK293T de manière dose- et temps-dépendante (20 à 150 μM, 0,5 à 20 h). Le traitement avec cette substance chimique entraîne une régulation positive des chaînes polyUb liées à la fois en K ⁴⁸ et en K⁶³. Il induit la mort cellulaire des HCT116 avec des valeurs d'EC50 de 6,3 μM.[1]

PR-619 améliore l'effet antitumoral sur le xénogreffe de CU chez des souris nues.

• Test Ub-PLA₂

  Les enzymes recombinantes dans 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM CaCl₂ et 2 mM β-mercaptoéthanol (tampon d'essai DUB) sont préincubées avec des doses uniques ou des plages de doses de PR-619 ou P22077 pendant 30 minutes dans une plaque à 96 puits avant l'ajout d'Ub-PLA₂ et de NBD C6-HPC. La libération d'un produit fluorescent dans la gamme linéaire de l'essai est surveillée à température ambiante à l'aide d'un lecteur de plaques de fluorescence. Le véhicule (2%(v/v) DMSO) et 10 mM de N-éthylmaléimide sont inclus comme contrôles. Lorsque ≥60% d'inhibition est observée, les valeurs d'EC50 sont déterminées à l'aide d'une équation de réponse dose-dépendante sigmoïdale.

• Lignées cellulaires

  HCT116, HEK293T

• Concentrations

  0.5-50 μM

• Temps dincubation

  72 h

• Méthode

  72 h hours later, 0.2 mg/mL resazurin prepared in phosphate-buffered saline is added to each well and the cells are incubated for an additional 3-6 h. The fluorescence of the resazurin reduction product is measured using Ex=535 nm and Em=590 nm filters on a fluorimeter. The EC50 values are calculated in Prism.