PNU-120596

N° de catalogueS2629 Lot:S262902

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Données techniques

Formule

C13H14ClN3O4
Poids moléculaire 311.72 N° CAS 501925-31-1
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 62 mg/mL (198.89 mM)
Ethanol 1 mg/mL (3.2 mM)
Water Insoluble
In Vivo (Ajoutez les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description PNU-120596 (Nsc 216666) est un modulateur allostérique positif de α7 nAChR avec une EC50 de 216 nM.
Cibles
α7 nAChR
216 nM(EC50)
In vitro PNU-120596 augmente le flux de calcium évoqué par l'agoniste (Ach) médié par une variante ingénierie du récepteur α7 nAChR humain. Ce composé augmente les courants évoqués par les agonistes (choline et ACh) médiés par les récepteurs de type sauvage et démontre également une prolongation prononcée de la réponse évoquée en présence continue de l'agoniste dans les ovocytes de Xenopus. Il augmente le temps d'ouverture moyen du canal des α7 nAChR mais n'a aucun effet sur la sélectivité ionique et relativement peu, voire pas du tout, d'effet sur la conductance unitaire. Lorsqu'il est appliqué à des tranches hippocampiques aiguës, ce produit chimique augmente la fréquence des courants postsynaptiques GABAergiques évoqués par l'ACh mesurés dans les neurones pyramidaux ; cet effet est supprimé par le TTX, suggérant qu'il module la fonction des α7 nAChR situés sur la membrane somatodendritique des interneurones hippocampiques. Outre la modulation positive de l'α7 nAChR, ce composé induit un profond retardement de la cinétique de désensibilisation, augmentant le potentiel de toxicité induite par le Ca2+ par une stimulation excessive de l'α7 nAChR. Il provoque des changements dans l'accessibilité de la cystéine au niveau du feuillet bêta interne, de la zone de transition et du site de liaison de l'agoniste lors de sa liaison à l'α7 nAChR. Les sites de liaison pour ce produit chimique ne se trouvent pas dans les sites de liaison de l'agoniste et il améliore la régulation du gating évoquée par l'agoniste des récepteurs nicotiniques en déclenchant des effets conformationnels similaires mais non identiques aux conformations de gating favorisées par l'Ach.
In Vivo L'administration systémique de PNU-120596 (1 mg/kg) à des rats améliore le déficit de gating auditif causé par l'amphétamine, un modèle proposé pour refléter une perturbation au niveau du circuit associée à la schizophrénie. Lorsqu'il est administré avant la carragénine, 30 mg/kg de ce composé atténuent significativement l'hyperalgésie mécanique et les déficits de support de poids pendant une durée allant jusqu'à 4 heures. Ce produit chimique atténue l'augmentation induite par la carragénine des niveaux de TNF-α et d'IL-6 dans l'œdème de la patte arrière ; le diclofénac n'a atténué que les niveaux d'IL-6. L'hyperalgésie mécanique établie induite par la carragénine ou la CFA est également partiellement inversée par cet agent.

Protocole (de référence)

Test kinase :[1]
  • Essai de fluorescence Ca2+

    Les cellules épithéliales humaines SH-EP1 exprimant une variante de l'α7 nAChR (α7*) sont cultivées dans un milieu essentiel minimal (MEM) contenant des acides aminés non essentiels, complété par 10 % de sérum de veau fœtal, de L-glutamine, 100 U/ml de pénicilline/streptomycine, 250 ng/mL de fungizone, 400 μg/mL d'hygromycine B et 800 μg/mL de généticine. α7* est une variante du α7 nAChR humain, avec deux mutations ponctuelles dans le premier domaine transmembranaire (T230P et C241S) qui permettent une expression fonctionnelle élevée dans les cellules SH-EP1 [Groppi VE, Wolfe ML, Berkenpas MB (2003) U.S. Patent 6,693,172 B1]. Les cellules sont cultivées dans un incubateur à 37 °C avec 6 % de CO2. Les cellules sont trypsinées et plaquées dans des plaques à 96 puits avec des parois latérales sombres et des fonds clairs à une densité de 2 × 104 cellules/puits 2 jours avant l'analyse. Les cellules sont chargées avec un mélange de Calcium reen-1AM dans du diméthylsulfoxyde anhydre et 20 % de pluronic F-127. Ce réactif est ajouté directement au milieu de croissance de chaque puits pour atteindre une concentration finale de 2 μM de Calcium Green-1 AM. Les cellules sont ensuite incubées dans le colorant pendant 1 heure à 37 °C, puis lavées quatre fois avec la solution saline équilibrée de Earle modifiée de Mark (MMEBSS) composée des éléments suivants (en mM) : 4 CaCl2, 0.8 MgSO4, 20 NaCl, 5.3 KCl, 5.6 D-glucose, 20 Tris-HEPES et 120 N-méthyl-D-glucamine, pH 7.4. Après le quatrième cycle, les cellules sont laissées à incuber à 37 °C pendant au moins 10 minutes. Le volume final de MMEBSS dans chaque puits est de 100 μL et de l'atropine est ajoutée à tous les puits pour une concentration finale de 1 μM. Un lecteur de plaques d'imagerie fluorométrique (FLIPR ; Molecular Devices, Union City, CA) est configuré pour exciter le Calcium Green à 488 nm en utilisant 500 mW de puissance et en lisant l'émission de fluorescence >525 nm. Une exposition de 0,5 seconde est utilisée pour illuminer chaque puits. La fluorescence est détectée à l'aide d'un ensemble de diaphragmes F de 2,0 ou 1,2. Après 30 secondes d'enregistrement de base, les composés d'essai sont ajoutés à chaque puits d'une plaque à 96 puits dans 50 μL d'une solution stock 3 ×. Dans chaque expérience, quatre puits sont utilisés comme contrôles du véhicule (0,2 % de DMSO).
Test cellulaire :[2]
  • Lignées cellulaires

    SH-SY5Y-α7 cells

  • Concentrations

    3-10 μM

  • Temps dincubation

    24 hours

  • Méthode

    SH-SY5Y-α7 cells are plated on 96-well plates at a density of 15,000 cells per well (100 μL of 1.5 × 105 cells per mL) in complete growth medium and placed into a 37 °C incubator for 20 to 24 hours. Complete growth medium then is replaced with experimental medium alone ("PNU-120596 free") or containing appropriate concentrations of this compound and returns to the 37 °C ncubator for 20 to 24 hours. The medium is then replaced with fresh experimental medium and 20 μL per well MTS solution and returned to the 37 °C incubator for 3 hours, after which the plate is read on a microplate spectrophotometer at an absorbance of 490 nm. For all data analysis, data are normalized to untreated compound-free wells (100% cell viability) and a background absorbance taken from wells containing experimental medium and MTS solution.
Étude animale :[1]
  • Modèles animaux

    male Sprague Dawley rats (weighing 250–300 g)

  • Dosages

    1 mg/kg

  • Administration

    PNU-120596 is intravenously administrated 5 minutes before auditory gating measurements.

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15858066/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17470817/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19411608/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22536953/

Validation du produit par le client

<p>C) A summary: MCAO-induced infarct volumes were significantly smaller in treated vs. untreated animals: p=0.0147 (n=10; two-tailed, the Mann–Whitney U-test). The results are presented as mean+S.E.M.<br /> </p>

, , PLoS One, 2013, 8(8): e73581.

PNU-120596 significantly reduces the size of brain injury induced by focal cerebral ischemia. Focal cerebral ischemia was induced by a transient (90 min) middle cerebral artery occlusion (MCAO). Then, 6 hrs post-MCAO, animals were given i.v. injections of either 1 mg/kg PNU-120596 dissolved in DMSO at 50 mM (i.e., treated group; n=10) or the matched amount of DMSO only (i.e., untreated group; n=10). Typical examples of injured whole-brain coronal sections (2 mm thick) obtained from untreated (i.e., DMSO only) (A) and treated (1 mg/kg PNU-120596) (B) animals. Treated and untreated animals were anesthetized and euthanized 24 hrs after MCAO (i.e., 18 hrs after PNU-120596 or DMSO injections) and brain sections were prepared for histological analysis. C) A summary: MCAO-induced infarct volumes were significantly smaller in treated vs. untreated animals: p=0.0147 (n=10; two-tailed, the Mann–Whitney U-test). The results are presented as mean+S.E.M.

Données de [ , , PLoS One, 2013, 8(8):e73581. ]

De Selleck PNU-120596 A été cité par 9 Publications

Systemic Administration of α7-Nicotinic Acetylcholine Receptor Ligands Does Not Improve Renal Injury or Behavior in Mice With Advanced Systemic Lupus Erythematosus [ Front Med (Lausanne), 2021, 8:642960] PubMed: 33928103
Inhibitory effect of sinomenine on lung cancer cells via negative regulation of α7 nicotinic acetylcholine receptor [ J Leukoc Biol, 2020, 10.1002/JLB.6MA0720-344RRR] PubMed: 32726882
Alpha 7 nicotinic receptor agonist and positive allosteric modulators improved social and molecular deficits of MK-801 model of schizophrenia in rats. [ Pharmacol Biochem Behav, 2020, 10.1016/j.pbb.2020.172916] PubMed: 32220620
Investigating the Binding Interactions of NS6740, a Silent Agonist of the Nicotinic Receptor [ Mol Pharmacol, 2019, 10.1124/mol.119.116244] PubMed: 31175182
Boosting Endogenous Resistance of Brain to Ischemia. [Sun F, et al. Mol Neurobiol, 2017, 54(3):2045-2059] PubMed: 26910820
Boosting Endogenous Resistance of Brain to Ischemia [Sun F, et al. Mol Neurobiol, 2016, 10.1007/s12035-016-9796-3] PubMed: 26910820
An Unaltered Orthosteric Site and a Network of Long-Range Allosteric Interactions for PNU-120596 in α7 Nicotinic Acetylcholine Receptors [ Chem Biol, 2015, 22(8):1063-73] PubMed: 26211363
A positive allosteric modulator of α7 nAChRs augments neuroprotective effects of endogenous nicotinic agonists in cerebral ischaemia [ Br J Pharmacol, 2013, 169(8):1862-78] PubMed: 23713819
A Type-II Positive Allosteric Modulator of α7 nAChRs Reduces Brain Injury and Improves Neurological Function after Focal Cerebral Ischemia in Rats. [Sun F, et al. PLoS One, 2013, 8(8): e73581] PubMed: 23951360

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