Picropodophyllin (AXL1717)

Dans les cellules intactes, le PPP inhibe efficacement la phosphorylation de l'IGF-1R, de l'Akt (Ser 473) et de l'Erk1/2 stimulée par l'IGF-1. Il inhibe spécifiquement la croissance cellulaire et induit l'apoptose dans les cellules tumorales positives pour l'IGF-1R cultivées. [1] Ce composé sensibilise synergiquement les cellules HMCL, les cellules MM humaines primaires et les cellules murines 5T33MM à l'ABT-737 et à l'ABT-199 en diminuant davantage la viabilité cellulaire et en améliorant l'apoptose. [3] Il supprime également synergiquement la prolifération et la motilité des cellules de carcinome hépatocellulaire. [4]

Chez les souris SCID xénogreffées avec des cellules humaines ES-1, BE et PC3, Picropodophyllin (PPP) (20 mg/kg/12 h, i.p.) provoque une régression tumorale complète. [1] Ce composé montre également une activité antitumorale marquée et provoque une augmentation significative de la survie dans le modèle murin 5T33MM. [2]

• Tests de tyrosine kinase in vitro.

  Un test de phosphorylation de substrat pTG catalysée par IGF-1R, utilisant un kit de test de tyrosine kinase sur plaque à 96 puits, est effectué. Nous utilisons un récepteur du facteur de croissance épidermique recombinant, l'IR immunoprécipité de HEPG2, l'IGF-1R immunoprécipité de cellules P6, et le surnageant de P6 immunodéplété en IGF-1R (représentant les « tyrosine kinases non-IGF-1R »). Après 30 minutes de traitement des récepteurs avec les composés désirés dans le tampon de kinase [50 mM de tampon HEPES (pH 7,4), 20 mM de MgCl₂, 0,1 MnCl₂ et 0,2 Na₃VO₄], la réaction de kinase est activée par l'ajout d'ATP. Le substrat polymère phosphorylé est sondé avec un anticorps monoclonal spécifique de la phosphotyrosine conjugué à la peroxydase de raifort, clone PT-66. La couleur est développée avec le substrat chromogène de la peroxydase de raifort, le dichlorure d'O-phénylènediamine, et quantifiée par spectrophotométrie (lecteur ELISA). L'autophosphorylation de la tyrosine de l'IGF-1R est analysée par un test ELISA en sandwich. En bref, des plaques à 96 puits sont revêtues pendant la nuit à 4°C avec 1 μg/puits d'un anticorps dirigé contre la sous-unité β de l'IGF-1R. Les plaques sont bloquées avec 1% de BSA dans du PBS Tween pendant 1 h, puis 80 μg/puits de lysat protéique total de la lignée cellulaire P6 sont ajoutés. Comme contrôle négatif, nous utilisons le lysat protéique total de la lignée cellulaire R-. Les composés étudiés sont ajoutés dans le tampon de tyrosine kinase sans ATP à température ambiante pendant 30 min avant l'activation de la kinase avec l'ATP. Le test de kinase est effectué à l'aide du kit Sigma (voir ci-dessus). Après spectrophotométrie, les valeurs d'IC50 des inhibiteurs sont déterminées à l'aide de la fonction REGRESSION du programme Statistica.

• Lignées cellulaires

  Melanoma cells (FM 55, SK-MEL-28, SK-MEL-5, C8161, DFB, DFW and AA), sarcoma cells (RD-ES), breast carcinoma cells (MCF 7), prostate carcinoma cells (PC3), hepatoma cells (HepG2) and embryonic mouse fibroblasts (P6 and R-)

• Concentrations

  ~15 μM

• Temps dincubation

  48 hours

• Méthode

  All of the standards and experiments for Picropodophyllin (PPP) are performed in triplicates using the Cell proliferation kit II, which is based on colorimetric change of the yellow tetrazolium salt 2,3-bis[2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl]-2H-tetrazolium-5-carboxanilide inner salt in orange formazan dye by the respiratory chain of viable cell.

• Modèles animaux

  SCID mice bearing ES-1, BE, or PC3 xenografts that express IGF-1R, or R- v-src (IGF-1R negative) and P12 (overexpressing IGF-1 and IGF-1R)

• Dosages

  20 mg/kg/12 h

• Administration

  i.p.