PF-477736

PF-477736 (128 nM) abroge le point de contrôle des dommages à l'ADN induits par la camptothécine de manière dose-dépendante dans les cellules CA46 et HeLa. Ce composé abroge efficacement l'arrêt en phase S induit par avec une augmentation correspondante des populations de cellules apoptotiques dans les cellules HT29. Ce produit chimique (540 nM) améliore la cytotoxicité induite par de manière dépendante du temps et de la dose dans les cellules HT29. Il potentialise l'activité inhibitrice de croissance d'un panel d'agents chimiothérapeutiques sur un large spectre de lignées cellulaires cancéreuses humaines déficientes en p53 dans l'essai MTT. L'ajout de ce composé (360 nM) à des cellules arrêtées par induit une augmentation spectaculaire de l'intensité de la phosphorylation de H2AX, reflétant un plus grand nombre de molécules γ-H2AX près des sites de dommages à l'ADN. [1] Ce produit chimique (0,5 nM) bloque sélectivement la phosphorylation de p73 et P53 en présence de curcumine dans les cellules HL-60. [2] Il (360 nM) supprime la phosphorylation induite par de l'histone H3 (Ser10) et de Cdc25C (Ser216) et potentialise l'apoptose dans les cellules COLO205. [3] Ce composé (250 nM) combiné à MK-1775 a une activité cytotoxique synergique marquée dans les cellules OVCAR-5. Il (250 nM) combiné à MK-1775 provoque l'accumulation de cellules avec un contenu en ADN entre 2N et 4N dans les cellules OVCAR-5. Ce produit chimique (250 nM) combiné à MK-1775 provoque une mitose prématurée avant la fin de la réplication de l'ADN, l'ADN endommagé conduisant à la mort cellulaire apoptotique dans les cellules OVCAR-5. [4]

Le PF-477736 (4 mg/kg i.v.) entraîne une demi-vie terminale (T1/2) de 2,9 heures, une AUC de 5,72 μg×hr/mL et une CLp de 11,8 mL/min/kg chez les rats. Ce composé améliore de manière dose-dépendante l'activité antitumorale d'une dose maximale tolérée dans le modèle murin de xénogreffe Colo205. Ce produit chimique (12 mg/kg) induit une augmentation de la phosphorylation de l'histone H3 (Ser10) et de la phospho-histone H2AX dans le modèle murin de xénogreffe Colo205. [1] Ce composé (15 mg/kg i.p.) améliore l'inhibition de la croissance tumorale induite et le retard de croissance tumorale dans les modèles de xénogreffe COLO205 et MDA-MB-231. [3] Ce produit chimique (10 mg/kg une fois par jour i.p.) combiné à MK-1775 (30 mg/kg deux fois par jour par voie orale) entraîne une plus grande inhibition de la croissance tumorale chez les souris porteuses de xénogreffes OVCAR-5. [4]

• Essai de liaison

  L'essai est réalisé dans une plaque à 96 puits pendant 20 minutes à 30℃ dans 0,1 mL de tampon d'essai contenant 50 mM TRIS pH 7,5, 0,4 M NaCl, 4 mM PEP, 0,15 mM NADH, 28 unités de lactate déshydrogénase/mL, 16 unités de pyruvate kinase/mL, 3 mM DTT, 0,125 mM Syntide-2, 0,15 mM ATP et 25 mM de chlorure de magnésium. Les essais sont initiés avec 1 nM de domaine kinase CHK1. L'inhibition de l'activité CHK1 est déterminée en mesurant les vitesses initiales en présence de concentrations variables de ce composé. Les données sont analysées à l'aide des logiciels Enzyme Kinetic et Excel et ajustées à un modèle cinétique pour une inhibition compétitive afin d'obtenir une valeur Ki. La sélectivité de la kinase de ce produit chimique est évaluée en le criblant à 1 μM ou 10 μM contre un panel d'environ 100 protéines kinases.

• Lignées cellulaires

  HT29, Colo205, PC-3, MDA-MB-231 and K562 cells

• Concentrations

  ~1 μM

• Temps dincubation

  96 hours

• Méthode

  The IC50 assay measures the antiproliferative effects of PF-477736 on p53-defective human cancer cell lines. Cells in each line are seeded in complete medium at an exponentially growing density in 96-well assay plate and allowed to attach for 16 hours. Serial dilutions of this compound are then done, and appropriate controls are added to each plate. Cells are incubated with drug for 96 hours. After incubation, MTT working stock diluted in complete medium is added to each well, and cells are incubated for 4 hours. After centrifugation and supernatant removal, DMSO is added to each well and plates are read on SpectraMax plate reader at 540 nm.

• Modèles animaux

  Colo205 xenograft mouse model

• Dosages

  40 mg/kg

• Administration

  intravenous injection