PF-04691502

Le PF-04691502 inhibe puissamment la PI3K de classe I recombinante et mTOR dans les essais biochimiques et supprime la transformation des fibroblastes aviaires médiée par la PI3K γ ou δ de type sauvage, ou la PI3Kα mutante. Dans les lignées cellulaires cancéreuses mutantes pour PIK3CA et délétées de PTEN, ce composé réduit la phosphorylation d'AKT T308 et d'AKT S473 (IC(50) de 7,5-47 nM et 3,8-20 nM, respectivement) et inhibe la prolifération cellulaire (IC(50) de 179-313 nM). Il inhibe l'activité de mTORC1 dans les cellules mesurée par un essai stimulé par les nutriments indépendant de PI3K, avec un IC(50) de 32 nM et inhibe l'activation des effecteurs en aval de PI3K et mTOR, y compris AKT, FKHRL1, PRAS40, p70S6K, 4EBP1 et S6RP. Une exposition à court terme à ce produit chimique inhibe principalement la PI3K, tandis que l'inhibition de mTOR persiste pendant 24 à 48 heures. Ce composé induit un arrêt du cycle cellulaire G(1), concomitant à une régulation positive de p27 Kip1 et à une réduction de Rb. [1]

L'activité antitumorale de PF-04691502 est observée dans les xénogreffes de U87 (PTEN null), SKOV3 (mutation PIK3CA) et de carcinome pulmonaire non à petites cellules. [1] Ce composé inhibe la croissance tumorale de 72% en 7 jours. L'imagerie TEP-FDG a révélé qu'il réduit considérablement le métabolisme du glucose. Les biomarqueurs tissulaires de l'activité de la voie PI3K/mTOR, p-AKT (S473) et p-RPS6 (S240/244), sont également considérablement inhibés après son traitement. [2]

• Essai Kinase

  L'essai de polarisation de fluorescence pour l'inhibition compétitive de l'ATP est réalisé comme suit : une solution de dilution de mPI3Kα (90 nM) est préparée dans un tampon d'essai frais (50 mM Hepes pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mM DTT, 0,05% CHAPS) et maintenue sur glace. La réaction enzymatique contient 0,5 nM de PI3Kα de souris (complexe p110α/p85α purifié à partir de cellules d'insectes), 30 μM de PIP2, du PF-04691502 (0, 1, 4 et 8 nM), 5 mM de MgCl₂ et des dilutions en série de l'ATP au double (0–800 μM). Le diméthylsulfoxyde final est de 2,5%. La réaction est initiée par l'ajout d'ATP et terminée après 30 minutes avec 10 mM d'EDTA. Dans une plaque de détection, 15 μL de mélange détecteur/sonde contenant 480 nM de domaine GST-Grp1PH et 12 nM de PIP3 fluorescent marqué au TAMRA dans un tampon d'essai sont mélangés à 15 μL de mélange de réaction de kinase. La plaque est agitée pendant 3 minutes et incubée pendant 35 à 40 minutes avant la lecture sur un LJL Analyst HT.

• Lignées cellulaires

  BT20, U87MG, and SKOV3 cells

• Concentrations

  0-3 mM

• Temps dincubation

  3 days

• Méthode

  BT20, U87MG, and SKOV3 cells are plated at 3,000 cell/well in 96-well culture plates in growth medium with 10% FBS. Cells are incubated overnight and treated with DMSO (0.1% final) or serial diluted this compound for 3 days. Resazurin is added to 0.1 mg/mL. Plates are incubated at 37 °C in 5% CO₂ for 3 hours. Fluorescence signals are read as emission at 590 nm after excitation at 530 nm. IC50 values are calculated by plotting fluorescence intensity to drug concentration in nonlinear curve

• Modèles animaux

  LSL-Kras^G12D heterozygous mice (B6.129-Kras ^tm4Tyj) and Pten^del mice (c;129S4-Pten ^tm1Hwu/J), Orthotopic transplant of ovarian tumors

• Dosages

  daily at either 7.5 or 10 mg/kg

• Administration

  Administered via oral gavage