PCI-34051

Le PCI-34051 possède une puissance prometteuse pour HDAC8 avec un K_i de 10 nM. Ce composé présente une sélectivité élevée (environ cinq fois) pour HDAC8 par rapport aux autres HDAC de classe I, y compris HDAC1. Il révèle une sélectivité supérieure à 200 fois par rapport à HDAC1 et HDAC6, et supérieure à 1000 fois par rapport à HDAC2, HDAC3 et HDAC10. Cette substance chimique inhibe la lignée tumorale ovarienne OVCAR-3 avec une GI50 de 6 μM et 15 % de mort cellulaire. Aucune acétylation significative de la tubuline ou de l'histone n'est observée dans les lignées cellulaires sensibles traitées avec ce composé à des concentrations inférieures à 25 μM à 24 heures ni à des temps plus précoces. Il induit un effet cytotoxique sélectif dans les lignées cellulaires dérivées uniquement de malignités des lymphocytes T. Ce composé induit une apoptose dépendante des caspases. Lorsque l'activité de la caspase-3 est mesurée à différents moments après le traitement avec 5 μM de cette substance chimique, des niveaux croissants d'activité sont observés de 12 à 24 à 48 heures, une autre caractéristique de l'apoptose, compatible avec les niveaux plus élevés d'activité de la caspase à ce moment. Il ne stimule pas le clivage de Bid, un effet caractéristique de la voie apoptotique extrinsèque. Alors que P116 et J.RT3-T.5 sont sensibles à ce composé, la lignée J.gamma1 déficiente en PLCγ1 révèle une diminution marquée de l'étendue de son apoptose induite. De plus, les niveaux de calcium à l'état stable influencent fortement l'apoptose induite par cette substance chimique. Il induit la libération du cytochrome c des mitochondries.[1]

Le PCI-34051 est un inhibiteur puissant et spécifique de l'histone désacétylase 8 (HDAC8).

• Activité histone désacétylase

  Pour la caractérisation du PCI-34051, les mesures sont effectuées dans un volume de réaction de 100 μL en utilisant des plaques d'essai à 96 puits dans un lecteur de plaques de fluorescence. Pour chaque isozyme. La protéine HDAC dans le tampon de réaction (50 mM HEPES, 100 mM KCl, 0,001 % Tween-20, 5 % diméthylsulfoxyde, pH 7,4, complété par de la sérumalbumine bovine à des concentrations de 0-0,05 %) est mélangée avec ce composé à diverses concentrations et laissée incuber pendant 15 min. La trypsine est ajoutée à une concentration finale de 50 nM, et l'acétyl-gly-Ala-(N-acétyl-Lys)-amino-4-méthylcoumarine est ajoutée à une concentration finale de 25-100 μM pour initier la réaction. Après un temps de latence de 30 min, la fluorescence est mesurée sur une période de 30 min en utilisant une longueur d'onde d'excitation de 335 nm et une longueur d'onde de détection de 460 nm. L'augmentation de la fluorescence en fonction du temps est utilisée comme mesure du taux de réaction.

• Lignées cellulaires

  A549 cell line, Ovcar-3 cell line

• Concentrations

  5 μM

• Temps dincubation

  24 hours

• Méthode

  Tumor cell lines and human umbilical vein endothelial cells are cultured for at least two doubling times, and growth is monitored at the end of PCI-34051 exposure using an Alamar Blue fluorometric cell proliferation assay as recommended by the manufacturer. This compound is assayed in triplicate wells in 96-well plates. The concentration required to inhibit cell growth by 50% (GI50) and 95% confidence intervals are estimated from nonlinear regression using a four-parameter logistic equation.

• Modèles animaux

  Male C57BL/6 and BALB/c mice

• Dosages

  40 mg/kg

• Administration

  i.p.