Nirogacestat (PF-03084014)

N° de catalogueS8018 Lot:S801801

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Données techniques

Formule

C27H41F2N5O
Poids moléculaire 489.64 N° CAS 1290543-63-3
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 97 mg/mL (198.1 mM)
Ethanol 97 mg/mL (198.1 mM)
Water Insoluble
In Vivo (Ajoutez les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Nirogacestat (PF-03084014, PF-3084014) est un inhibiteur sélectif de la gamma-secretase avec une IC50 de 6,2 nM dans un test sans cellules, et il induit l'apoptosis. Phase 2.
Cibles
gamma-secretase
(cell-free assay)
6.2 nM
In vitro Nirogacestat (PF-03084014) inhibe le clivage du récepteur Notch dans des essais cellulaires utilisant des cellules HPB-ALL qui hébergent des mutations dans les domaines d'hétérodimérisation et de PEST dans Notch1 avec une IC50 de 13,3 nM. Il régule à la baisse les gènes cibles de Notch Hes-1 et l'expression de cMyc dans les cellules HPB-ALL avec des IC50 de <1 nM et 10 nM, respectivement, et inhibe la croissance cellulaire d'un sous-ensemble de lignées cellulaires T-ALL humaines (HPB-ALL, DND-41, TALL-1 et Sup-T1) par induction de l'arrêt du cycle cellulaire et de l'apoptosis avec des IC50 de 30 à 100 nM. Ce composé réduit la prolifération des HUVEC avec une IC50 de 0,5 μM et diminue la formation de lumière avec une valeur IC50 de 50 nM. Il (1 μM) n'a pas d'effet antiprolifératif dans les cellules MX1 ; cependant, il inhibe la migration de 95%.
In Vivo Le Nirogacestat (PF-03084014) administré par voie orale en une dose unique de 200 mg/kg provoque une inhibition maximale de NICD d'environ 80% dans les tumeurs xénogreffes HPB-ALL. Il montre une activité antitumorale robuste dans ce mode avec une inhibition maximale de la croissance tumorale d'environ 92% à une dose de 150 mg/kg, accompagnée d'une réduction significative de NICD/Notch1, de l'indice mitotique tumoral (Ki67) et de la coloration de l'apoptosis (caspase-3 activée). À 120 mg/kg, ce composé induit l'apoptosis, l'antiprolifération, réduit la capacité d'auto-renouvellement des cellules tumorales, altère la vascularisation tumorale et diminue l'activité métastatique chez les souris porteuses de tumeurs HCC1599 de cancer du sein. Son traitement présente une activité antitumorale significative dans différents types de modèles de xénogreffes mammaires avec une valeur TGI d'au moins 50%.

Protocole (de référence)

Test kinase :[3]
  • dosage de γ-secretase

    Un fragment d'ADN codant pour les acides aminés 596 à 695 de l'isoforme 695-aa de l'APP (APP695) et la séquence Flag (DYKDDDDK) à l'extrémité C-terminale est généré par amplification PCR avec des oligonucléotides conçus de manière appropriée et l'ADNc APP695. Le Met qui sert de site de démarrage de la traduction est le résidu 596 de l'APP695 (le résidu P1 par rapport au site de clivage de la β-secretase). Ce fragment d'ADN est inséré dans le vecteur d'expression procaryote pET2-21b. La protéine recombinante, C100Flag, est surproduite chez Escherichia coli [souche BL21(DE3)] et purifiée par chromatographie sur colonne Mono-Q. Le C100Flag (1,7 μM) est incubé avec des membranes cellulaires (0,5 mg/mL) en présence de CHAPSO, CHAPS (3-[(3-cholamidopropyl)dim-ethylammonio]-1-propanesulfonate) ou Triton X-100 (0, 0,125, 0,25, 0,5 ou 1%) dans le tampon B (50 mM Pipes, pH 7,0y 5mM MgCl2/5 mM CaCl2/150 mM KCl) à 37°C. Les réactions sont arrêtées par addition de RIPA (150 mM NaCl/1,0% NP-40/0,5% désoxycholate de sodiumy 0,1% SDS/50 mM Tris HCl, pH 8,0) et ébullition pendant 5 min. Les échantillons sont centrifugés et les solutions de surnageant sont analysées pour les peptides Aβ par ECL. Les produits liés à Aβ40 et Aβ42 issus du traitement médié par la γ-secretase du C100Flag possèdent un Met à l'extrémité N-terminale et sont ainsi définis comme M-Aβ40 et M-Aβ42, respectivement. De même, la solution de surnageant (0,125 mg/mL) de membranes cellulaires HeLa extraites au CHAPSO (γ-secretase solubilisée) est incubée avec C100Flag (1,7 μM) dans le tampon B contenant 0,25% de CHAPSO et ensuite analysée pour M-Aβ40 et M-Aβ42 en utilisant l'ECL. Ce composé, Nirogacestat (PF-03084014), est utilisé dans le contexte expérimental.
Test cellulaire :[1]
  • Lignées cellulaires

    Human T-ALL cell lines HPB-ALL

  • Concentrations

    ~1 μM

  • Temps dincubation

    7 days

  • Méthode

    Cells are seeded in 96-well plates at 10,000 cells/well in growth media supplemented with 10% fetal bovine serum. Serial dilutions of Nirogacestat (PF-03084014) are done in DMSO, appropriate controls or designated concentrations of this compound are added to each well, and cells are incubated at 37℃ for 7 days (final DMSO content 0.1%). Resazurin at a final concentration of 0.1 mg/mL is added to the cells and plates are incubated for 2 to 4 hours. Fluorescent signals are read as emission at 590 nm after excitation at 560 nm.
Étude animale :[1]
  • Modèles animaux

    Human T-cell acute lymphoblastic leukemia xenografts HPB-ALL

  • Dosages

    150 mg/kg

  • Administration

    p.o. twice daily

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20530712/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22806875/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10801983/

Validation du produit par le client

The expression of p-EGFR and NICD was assessed by western blot after treatment for 3 d.

Données de [ , , Cell Prolif, 2018, 51(3):e12424 ]

(F) Tumour tissues were further analysed to detect the efficacy of the inhibitors by IHC staining using p-EGFR and Notch1. (4Fa) Notch1 staining was mostly confined on the cell membrane. (4Fc) After Erlotinib treatment, the Notch1 protein was cleaved and translocated to the nucleus. (4Fb) p-EGFR was overexpressed in the control group. (4Fd) Erlotinib treatment inhibited p-EGFR expression. (4Fe-f) PF-03084014 treatment reduced both Notch1 and p-EGFR expression. (4Fg-h) Synthetic therapy reduced the activation of Notch1 and EGFR pathway. Scale bar = 50 μm. *P < .05, **P < .01, ***P < .001

Données de [ , , Cell Prolif, 2017, doi: 10.1111/cpr.12424 ]

De Selleck Nirogacestat (PF-03084014) A été cité par 21 Publications

Calorie restriction activates a gastric Notch-FOXO1 pathway to expand ghrelin cells [ J Cell Biol, 2024, 223(10)e202305093] PubMed: 38958606
Activation of the γ-secretase/NICD-PXR/Notch pathway induces Taxol resistance in triple-negative breast cancer [ Biochem Pharmacol, 2024, 230(Pt 2):116577] PubMed: 39427919
Multiomic analyses reveal new targets of polycomb repressor complex 2 in Schwann lineage cells and malignant peripheral nerve sheath tumors [ Neurooncol Adv, 2024, 6(1):vdae188] PubMed: 39620202
Inhibition of Notch Signaling Enhances Antitumor Activity of Histone Deacetylase Inhibitor LAQ824 [ Int J Mol Sci, 2023, 24(17)13660] PubMed: 37686467
Simultaneous Inhibition of Ceramide Hydrolysis and Glycosylation Synergizes to Corrupt Mitochondrial Respiration and Signal Caspase Driven Cell Death in Drug-Resistant Acute Myeloid Leukemia [ Cancers (Basel), 2023, 15(6)1883] PubMed: 36980769
In vitro effects of gamma-secretase inhibition in HPV-positive and HPV-negative head and neck squamous cell carcinoma [ Invest New Drugs, 2023, 41(2):193-201] PubMed: 36809443
Pharmacological conversion of gut epithelial cells into insulin-producing cells lowers glycemia in diabetic animals [ J Clin Invest, 2022, 132(24)e162720] PubMed: 36282594
DT7 peptide-modified lecithin nanoparticles co-loaded with γ-secretase inhibitor and dexamethasone efficiently inhibit T-cell acute lymphoblastic leukemia and reduce gastrointestinal toxicity [ Cancer Lett, 2022, 533:215608] PubMed: 35240234
BRAFV600E;K601Q metastatic melanoma patient-derived organoids and docking analysis to predict the response to targeted therapy [ Pharmacol Res, 2022, 182:106323] PubMed: 35752358
Chemical induction of gut β-like-cells by combined FoxO1/Notch inhibition as a glucose-lowering treatment for diabetes [ Mol Metab, 2022, 66:101624] PubMed: 36341906

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