MK-2206 Dihydrochloride

MK-2206 2HCl est un inhibiteur allostérique et est activé par le domaine d'homologie de la pleckstrine. Ce composé inhibe l'auto-phosphorylation d'Akt T308 et S473. Il empêche également la phosphorylation médiée par Akt des molécules de signalisation en aval, y compris TSC2, PRAS40 et les protéines ribosomales S6. [1] Ce produit chimique inhibe les lignées cellulaires Ras de type sauvage (WT) (A431, HCC827 et NCI-H292) plus puissamment que les lignées cellulaires Ras mutantes (NCI-H358, NCI-H23, NCI-H1299 et Calu-6). Il montre également des réponses synergiques en combinaison avec des agents cytotoxiques dans les cellules tumorales pulmonaires NCI-H460 ou ovariennes A2780. [2] L'inhibition d'Akt médiée par MK-2206 ou par siRNA active fortement l'autophagy dans les cellules de gliome humain. Cependant, le silençage du facteur d'élongation eucaryote-2 (eEF-2) supprime l'autophagy induite par ce composé, avec une promotion de la mort cellulaire apoptotique. [3]

MK-2206 2HCl montre 60% de TGI et inhibe plus de 70% de phospho-Akt1/2 (T308 et S473) dans des xénogreffes de cancer ovarien A2780 à une dose de 240 mg/kg. [1] Ce composé présente une activité antitumorale significative dans les xénogreffes NCI-H292 en combinaison. [2]

• Essai des kinases Akt

  Les kinases Akt sont dosées par un substrat peptidique biotinylé dérivé de GSK. L'étendue de la phosphorylation du peptide est déterminée par fluorescence résolue en temps homogène (HTRF) en utilisant un anticorps monoclonal couplé à un chélate de lanthanide (Lance) spécifique du phosphopeptide en combinaison avec un fluorophore allophycocyanine (SA-APC) lié à la streptavidine qui se liera à la partie biotine sur le peptide. Lorsque le Lance et l'APC sont à proximité, un transfert d'énergie non radiatif a lieu du Lance à l'APC, suivi d'une émission de lumière de l'APC à 655 nm. Tampon d'essai 10X : 500 mM HEPES, pH 7,5, 1 % PEG, 16,6 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1 % BSA, 20 mM 9-glycérol phosphate ; Tampon de trempe 50 mM HEPES pH 7,3, 16,6 mM EDTA, 0,1 % BSA, 0,1 % Triton X-100, 0,17 nM anticorps monoclonal marqué, 0,0067 mg/mL SA-APC ; Solution de travail ATP/MgCl₂ : 1X Tampon d'essai, 1 mM DTT, 1X PIC, 5 % glycérol, Akt actif ; Solution de travail peptidique : 1X Tampon d'essai, 1 mM DTT, 1X PIC, 5 % glycérol, 2 TM peptide biotinylé GSK. La réaction est assemblée en ajoutant 16 µL de solution de travail ATP/MgCl₂ aux puits appropriés. MK-2206 2HCl ou véhicule (1,0 µL) est ajouté, suivi de 10 µL de solution de travail peptidique. La réaction est démarrée en ajoutant 13 µL de solution de travail enzymatique et en mélangeant. La réaction est laissée à se dérouler pendant 50 min, puis arrêtée par l'ajout de 60 µL de tampon de trempe HTRF. Les réactions arrêtées sont incubées à température ambiante pendant au moins 30 min, puis lues dans l'instrument.

• Lignées cellulaires

  A431, HCC827, NCI-H292, NCI-H358, NCI-H23, NCI-H1299, Calu-6 and NCI-H460 cells

• Concentrations

  0, 0.3, 1 and 3 μM

• Temps dincubation

  72 or 96 hours

• Méthode

  MK-2206 2HCl is dissolved in DMSO as a stock solution and diluted by culture media before use. Cells are seeded at a density of 2-3 × 10³ in 96-well plates and incubated for 24 hours. Then this compound (0, 0.3, 1 and 3 μM) is added to the cells. Cell proliferation is determined after 72 or 96 hours.

• Modèles animaux

  SK-OV-3, NCI-H292, HCC70, PC-3, and NCI-H460 models in male CD1-nude mice

• Dosages

  120 mg/kg

• Administration

  Orally administered