Fiche technique

Description biologique

Spécificité	Melanoma Associated Antigen 100+ / 7 kDa Antibody [G24P23] détecte les niveaux endogènes de la protéine totale Melanoma Associated Antigen 100+ / 7 kDa.
Contexte	Les protéines Melanoma Associated Antigen 100+ / 7 kDa (MAGE) sont des antigènes associés aux tumeurs, typiquement restreints aux cellules germinales du testicule dans les tissus adultes normaux, mais exprimées de manière aberrante dans divers cancers, y compris le mélanome, le gliome, le poumon, la vessie et le myélome multiple. La désignation « 100+/7 kDa » fait référence à des variants ou des isoformes avec des poids moléculaires d'environ 100 kDa et 7 kDa. Structurellement, les protéines MAGE partagent un domaine d'homologie MAGE (MHD) conservé d'environ 200 acides aminés, composé de deux domaines hélice-aile formant une fente profonde pour la liaison de peptides ou de protéines, flanqués de régions N- et C-terminales variables. Fonctionnellement, les protéines MAGE peuvent agir comme des moteurs oncogènes en interagissant avec les RING-type E3 ubiquitin ligases, modulant les voies de dégradation des protéines qui régulent l'apoptose, la prolifération et le métabolisme ; par exemple, MAGE-A3 favorise la survie tumorale en stimulant la dégradation de p53 médiée par TRIM28, tandis que MAGE-A4 peut induire l'apoptose via différents partenaires protéiques. Leur expression spécifique à la tumeur, leur plasticité structurelle et leurs rôles oncogènes font des MAGE à la fois des biomarqueurs et des cibles thérapeutiques potentielles en immunothérapie du cancer.

Spécificité

Melanoma Associated Antigen 100+ / 7 kDa Antibody [G24P23] détecte les niveaux endogènes de la protéine totale Melanoma Associated Antigen 100+ / 7 kDa.

Contexte

Les protéines Melanoma Associated Antigen 100+ / 7 kDa (MAGE) sont des antigènes associés aux tumeurs, typiquement restreints aux cellules germinales du testicule dans les tissus adultes normaux, mais exprimées de manière aberrante dans divers cancers, y compris le mélanome, le gliome, le poumon, la vessie et le myélome multiple. La désignation « 100+/7 kDa » fait référence à des variants ou des isoformes avec des poids moléculaires d'environ 100 kDa et 7 kDa. Structurellement, les protéines MAGE partagent un domaine d'homologie MAGE (MHD) conservé d'environ 200 acides aminés, composé de deux domaines hélice-aile formant une fente profonde pour la liaison de peptides ou de protéines, flanqués de régions N- et C-terminales variables. Fonctionnellement, les protéines MAGE peuvent agir comme des moteurs oncogènes en interagissant avec les RING-type E3 ubiquitin ligases, modulant les voies de dégradation des protéines qui régulent l'apoptose, la prolifération et le métabolisme ; par exemple, MAGE-A3 favorise la survie tumorale en stimulant la dégradation de p53 médiée par TRIM28, tandis que MAGE-A4 peut induire l'apoptose via différents partenaires protéiques. Leur expression spécifique à la tumeur, leur plasticité structurelle et leurs rôles oncogènes font des MAGE à la fois des biomarqueurs et des cibles thérapeutiques potentielles en immunothérapie du cancer.

Informations dutilisation

Application

IHC, FCM

Dilution

IHC

1:5 - 1:20

Réactivité

Human

Source

Mouse Monoclonal Antibody

MW

Tampon de stockage

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Stockage
(À partir de la date de réception)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Méthodes expérimentales
IHC	Experimental Protocol： Deparaffinization/Rehydration 1. Deparaffinize/hydrate sections: 2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each. 3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each. 4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each. 5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each. 6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min. Staining 1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each. 2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min. 3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 4. Wash sections in wash buffer for 5 min. 5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature. 6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C. 7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each. 8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature. 9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each. 10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use. 11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity. 12. Immerse slides in dH2O. 13. If desired, counterstain sections with hematoxylin. 14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each. 16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Méthodes expérimentales

IHC

Experimental Protocol：

Deparaffinization/Rehydration

1. Deparaffinize/hydrate sections:

2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.

3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.

4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.

5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.

6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.

Staining

1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.

2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.

3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

4. Wash sections in wash buffer for 5 min.

5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.

6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.

7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.

8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.

9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.

10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.

11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.

12. Immerse slides in dH2O.

13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.

14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.

16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Références

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26910052/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23946777/

Données dapplication

IHC

Validé par Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human melanoma tissue with F3175 at 1:20 dilution.