Laduviglusib (CHIR-99021) Hydrochloride

CHIR-99021 montre une s llectivit l sup lrieure l 500 fois pour la GSK-3 par rapport l ses homologues les plus proches CDC2 et ERK2, ainsi qu' l d'autres prot leines kinases. De plus, CHIR-99021 ne pr lsente qu'une faible liaison l un panel de 22 r lcepteurs pharmacologiquement pertinents et peu d'activit l inhibitrice contre un panel de 23 enzymes non kinases. CHIR-99021 induit l'activation de la glycog lne synthase (GS) dans les cellules CHO-IR exprimant le r lcepteur de l'insuline avec une EC50 de 0,763 lM. [1] En plus de simuler les actions de l'insuline, l'inhibition de la GSK-3 par CHIR-99021 (3 lM) augmente le l-cat lenine cytosolique libre de 1,9 fois, imitant la voie de signalisation canonique Wnt dans les pr l-adipocytes 3T3-L1. Pendant les 3 premiers jours de diff lrenciation, le traitement au CHIR-99021 inhibe la diff lrenciation des pr l-adipocytes avec une IC50 de 0,3 lM en bloquant l'induction de la prot leine de liaison au CCAAT/enhancer l (C/EBP l) et du r lcepteur l activation des prolif lrateurs de peroxysomes l (PPAR l). [2] Contrairement au chlorure de lithium et l l'AR-A014418, le traitement au CHIR-99021 ne r lduit pas la viabilit l des cellules INS-1E m lme l des concentrations llev les. Au lieu de cela, CHIR-99021 augmente de mani lre robuste le taux de prolif lration des cellules INS-1E de mani lre d lpendant de la dose, et inhibe significativement la mort des cellules INS-E induite par un taux llev l de glucose et de palmitate de mani lre d lpendant de la concentration. CHIR-99021 favorise la r lplication des cellules b lta primaires dans les llots de rat isol ls l des concentrations aussi faibles que 1 lM, avec une augmentation de 2 l 3 fois de la r lplication cellulaire l 5 lM de traitement au CHIR-99021. [3]

L'administration orale de CHIR-99021 l 30 mg/kg am lliore le m ltabolisme du glucose dans un mod lle rongeur de diab lte de type 2, avec une r lduction maximale de la glyc l lmic plasma de pr ls de 150 mg/dl 3 l 4 heures apr ls l'administration, tandis que l'insuline plasmatique reste l des niveaux lquivalents ou inf lrieurs l ceux du groupe t lmoin. L'administration orale de CHIR-99021 l 16 ou 48 mg/kg 1 heure avant les tests d'hyperglyc l lmic orale chez les rats ZDF am lliore significativement la tol lrance au glucose avec une r lduction de 14 % et 33 % de la glyc l lmic plasmatique l 16 mg/kg et 48 mg/kg respectivement, et la dose plus llev lee de CHIR-99021 r lduit lgalement l'hyperglyc l lmic avant le test d'hyperglyc l lmic orale. [1]

• Essais kinases sans cellules

  Des plaques de polypropyl lene l 96 puits sont remplies de 300 lL/puits de tampon (50 mM Tris HCl, 10 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 1 mM dithiothr leitol, 25 mM l-glyc lrophosphate, 1 mM NaF, 0,01 % BSA, pH 7,5) contenant 27 nM de GSK-3 l ou 29 nM de GSK-3 l, et 0,5 lM de substrat peptidique biotine-CREB. Diverses concentrations de CHIR-99021 sont ajout les dans 3,5 lL de DMSO, suivies de 50 lL de stock d'ATP pour obtenir une concentration finale de 1 lM d'ATP dans tous les essais sans cellules. Apr ls incubation, des aliquotes de 100 lL en triple sont transf lr les dans des plaques Combiplate huit contenant 100 lL/puits de 50 lM d'ATP et 20 mM d'EDTA. Apr ls 1 heure, les puits sont rinc ls cinq fois avec du PBS, remplis de 200 lL de liquide de scintillation, scell ls, laiss ls 30 minutes, et compt ls dans un compteur l scintillation. Toutes les letapes sont effectu les l temp lrature ambiante.

• Lignées cellulaires

  INS-1E

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 20 μM

• Temps dincubation

  1, or 4 days

• Méthode

  Cells are maintained for 24 hours in starvation medium (culture medium with only 5 mM glucose, 1% fetal calf serum). Then cells are exposed to various concentrations of CHIR-99021 for 1, or 4 days. Cell number is measured by staining of cellular DNA with CyQuant dye, which becomes fluorescent when bound to DNA. Fluorescence is measured after 30 minutes of incubation using the FLUOstar Optima reader. Cell replication is determined by BrdUrd incorporation. BrdUrd labeling solution is added to the medium for the last 4 hours before the cells are fixed using FixDenat solution and incubated with monoclonal anti-BrdUrd-POD antibodies. After substrate solution is added to each well, the light emission is measured in a microplate luminometer using the Analyst HT detection system.

• Modèles animaux

  Female db/db mice or male ZDF rats with type 2 diabetes

• Dosages

  ~48 mg/kg

• Administration

  Orally