Ibrutinib (PCI-32765)

L'ibrutinib montre un effet inhibiteur puissant et irréversible et une sélectivité pour l'activité enzymatique de Btk. Dans la lignée cellulaire DOHH2 activée par la voie BCR, ce composé inhibe l'autophosphorylation de Btk, la phosphorylation du substrat physiologique de Btk PLCγ, et la phosphorylation de la kinase en aval, ERK avec une IC50 de 11 nM, 29 nM et 13 nM, respectivement. [1] Il présente une induction significative dose-dépendante et temps-dépendante de la cytotoxicité dans les cellules de leucémie lymphoïde chronique (LLC). De plus, ce composé induit la mort cellulaire dépendante de l'activation de la voie des caspases et antagonise la capacité des cellules de LLC à proliférer après la signalisation TLR. [2] Une étude récente montre que ce produit chimique inhibe la prolifération des cellules B primaires activées par le BCR avec une IC50 de 8 nM et entraîne une inhibition de la production de TNFα, IL-1β et IL-6 dans les monocytes primaires avec une IC50 de 2,6 nM, 0,5 nM et 3,9 nM, respectivement. [3]

Dans un modèle d'arthrite induite par le collagène, l'Ibrutinib réduit significativement les scores cliniques d'arthrite, reflétant le gonflement des pattes et l'inflammation articulaire, en inhibant l'activation des cellules B. Dans un modèle de lupus MRL-Fas(lpr), ce composé réduit la maladie rénale et la production d'auto-anticorps. [1] Dans un modèle murin TCL1 de LLC par transfert adoptif, ce composé (25 mg/kg/jour) provoque une lymphocytose précoce transitoire et retarde la progression de la maladie LLC. [4]

• Essais Kinase

  Les valeurs d'IC50 de la kinase in vitro sont mesurées à l'aide d'un dosage de liaison par filtration au ³³P après 1 heure d'incubation de la kinase, du ³³P-ATP, de l'Ibrutinib et du substrat [0,2 mg/mL poly(EY)(4:1]. Les dosages sont effectués chez Reaction Biology.

• Lignées cellulaires

  Chronic lymphocytic leukemia (CLL) cells

• Concentrations

  0.01-100 μM

• Temps dincubation

  48 hours

• Méthode

  MTT (3'[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide) assays are performed to determine cytotoxicity. Briefly, cells (CLL B cells or healthy volunteer T cells or NK cells) are incubated for 48 hours with different concentrations of Ibrutinib, or vehicle control. MTT reagent is then added, and plates are incubated for an additional 20 hours before washing with protamine sulfate in phosphate-buffered saline. Dimethyl sulfoxide is added, and absorbance is measured by spectrophotometry at 540 nm in a Labsystems plate reader. Cell viability is also measured at various time points with the use of annexin/PI flow cytometry. Data are analyzed with Expo-ADC32 software package. Results are expressed as the percentage of total positive cells over untreated control. Experiments examining caspase-dependent apoptosis includes the addition of 100μM Z-VAD.

• Modèles animaux

  MRL-Fas(lpr) lupus model and collagen-induced arthritis model.

• Dosages

  ≤50 mg/kg

• Administration

  Administered via p.o.