GSK3787

GSK3787 antagonise irréversiblement les PPARδ humains et murins qui modifient de manière covalente la Cys249 au sein de la poche de liaison du ligand. Ce composé (1 μM) antagonise efficacement la transcription stimulée par l'agoniste GW0742 de CPT1a et PDK4 dans les cellules musculaires squelettiques humaines, et antagonise efficacement l'expression génique basale de CPT1a. Il ne montre aucune activité antiproliférative efficace contre les cellules de cancer colorectal. [1]

Cette substance chimique (1 μM) antagonise complètement l'expression génique d'Angptl4 dépendante de PPARβ/δ induite par 50 nM de GW0742 dans les fibroblastes de type sauvage et dans les kératinocytes. Elle (1 μM) antagonise largement l'expression des ARNm d'Angptl4 et d'Adrp induite par 50 nM de GW0742 dans les cellules de cancer de la peau A341. Ce composé (1 μM) antagonise largement l'expression des ARNm d'Angptl4 induite par GW0742 dans les lignées cellulaires cancéreuses MCF7 (sein), Huh7 (foie) et HepG2 (foie) mais pas dans les cellules H1838 ou A549 (poumon). Elle (1 μM) antagonise largement l'augmentation de l'ARNm d'Adrp induite par GW0742 dans les cellules Huh7 et HepG2 mais pas dans les cellules H1838. Cette substance chimique n'antagonise pas l'expression basale de ces deux gènes cibles PPARβ/δ dans ces cellules. Ni GW0742 ni ce composé n'ont d'effet sur la prolifération cellulaire de ces cellules à des concentrations allant de 0,1 à 10 μM. Il est capable de moduler l'association des peptides co-régulateurs de PPARβ/δ et de PPARγ en réponse à l'activation du ligand. L'efficacité de cette substance chimique à moduler l'activité de PPARγ est nettement inférieure à son efficacité en tant qu'antagoniste de PPARβ/δ. [2]

GSK3787 antagonise l'expression génique dépendante de PPARβ/δ induite par le ligand in vivo. L'administration orale de ce composé n'a aucun effet sur l'expression des ARNm d'Angptl4 et d'Adrp dans l'épithélium du côlon de souris. La co-administration de cette substance chimique (10 mg/kg) prévient efficacement l'expression induite par GW0742 des ARNm d'Angptl4 et d'Adrp dans l'épithélium du côlon de souris de type sauvage, ce qui est corrélé à une occupation réduite du promoteur de PPARβ/δ sur les gènes Angptl4 et Adrp. L'administration de ce composé n'a eu aucun effet sur la tolérance au glucose. [2]

• Essai de liaison par saturation

  À l'aide de plaques de culture à 96 puits, 50 nM de LBD de PPARG humain purifié et la concentration souhaitée de [³H]GW3738 sont dilués dans un volume total de 100 μL avec un tampon composé de 50 mM de KCl, 5 mM d'EDTA, 10 mM de dithiothréitol (DTT), 50 mM de HEPES, à pH 7. Les essais de liaison par saturation sont réalisés en utilisant des concentrations de ce composé allant de 1 à 250 nM. La liaison non spécifique à chaque concentration de [³H]GW3738 est estimée dans des incubations parallèles contenant 50 μM de GW 3738 non marqué. Les plaques sont incubées pendant 2 h à température ambiante. Le ligand libre est séparé du ligand lié au récepteur par chromatographie d'exclusion de taille à l'aide de colonnes de centrifugation au format 96 puits disponibles dans le commerce. Des échantillons (50 μL) de chaque puits d'une seule plaque de test sont chargés sur un bloc de filtration sur gel à 96 puits équilibré en tampon et en température. Le bloc est placé sur une plaque de microtitration propre et centrifugé à 1100 g pendant 4 min. Du liquide de scintillation (180 ul) est ajouté à chaque puits de la plaque contenant l'éluant, et les plaques sont scellées et laissées à équilibrer pendant au moins 4 h avant d'être comptées dans un compteur. La quantité de liaison non spécifique à chaque concentration de [³H]GW3738 est soustraite de tous les puits et des tracés de la concentration de cette substance chimique par rapport aux comptes par minute (cpm) liés sont construits. Les valeurs de K_d pour [³H]GW3738 sont déterminées à partir d'un ajustement non linéaire des moindres carrés des données à un modèle de liaison simple.