Entospletinib (GS-9973)

Entospletinib (GS-9973) présente une bonne perméabilité bidirectionnelle à travers les monocouches de cellules Caco-2 in vitro. Dans les cellules, il présente également une excellente sélectivité pour Syk et inhibe puissamment l'activation et la prolifération des lymphocytes B médiées par le BCR, ainsi que la production de cytokines stimulée par les complexes immuns dans les monocytes. [1] La combinaison de ce composé inhibe de manière synergique la viabilité des cellules de LLC et perturbe davantage la signalisation des chimiokines. [2]

Entospletinib (GS-9973) (1 mg/kg p.o.) montre une biodisponibilité modérée à élevée chez le rat et le chien. Dans un modèle d'arthrite induite par le collagène chez le rat, il (1-10 mg/kg p.o.) inhibe significativement l'inflammation de la cheville. De plus, ce composé montre également une activité modificatrice de la maladie dans de multiples mesures histologiques, y compris l'inhibition de la formation de pannus, des dommages cartilagineux, de la résorption osseuse et de la formation osseuse périostée avec des ED50 allant de 1,2 à 3,9 mg/kg. [1]

• Essais de kinases

  L'activité de la kinase Syk exprimée par baculovirus pleine longueur est mesurée dans un format d'essai basé sur Lance dans un volume final de 25 μL contenant 25 mM Tris–HCl, pH 7,5, 5 mM β-glycérophosphate, 2 mM DTT, 0,1 mM Na₃VO₄, 10 mM MgCl₂, 0,5 μM de substrat peptidique biotinylé Promega PTK 1, 0,01 % de caséine, 0,01 % de Triton X-100 et 40 mM d'ATP (Km pour l'ATP) incubé à température ambiante pendant 60 min. Les réactions sont arrêtées par l'ajout de 30 mM d'EDTA contenant 30 μL de SA-APC et 4 nM d'anticorps PT-66 et les plaques sont mesurées sur un Perkin-Elmer Envision. Les valeurs d'IC50 pour Entospletinib (GS-9973) sont déterminées à l'aide d'un algorithme de régression linéaire à quatre paramètres.

• Lignées cellulaires

  MV-4-11 cells

• Concentrations

  ~10 μM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  Functional impact on cellular Flt3 activity is determined by measuring the inhibition of MV-4-11 cell proliferation by Entospletinib (GS-9973). A total of 104 cells are diluted in RPMI medium containing 10% FBS in 96-well flat-bottomed tissue culture plates and incubated with compound dilutions for 72 h at 37 癈. Alamar blue (10%) is added to the cells, which were incubated for an additional 12-18 h at 37 癈, and inhibition of the relative cell numbers is determined by spectrophotometer readings at 570/600 nm.

• Modèles animaux

  Rat Collagen-Induced Arthritis (CIA) Model

• Dosages

  ~10 mg/kg bid

• Administration

  p.o.