Fostamatinib disodium hexahydrate

Le R788 est une prodrogue de l'inhibiteur de la tyrosine kinase de la rate (Syk) R406. Le R788 est un inhibiteur compétitif de la liaison à l'ATP avec un Ki de 30 nM. Le R788 inhibe de manière dose-dépendante la dégranulation des CHMC médiée par les anti-IgE avec une EC50 de 56 nM. Le R788 inhibe également la production et la libération induites par les anti-IgE de LTC4 et de cytokines et chimiokines, y compris le TNFα, l'IL-8 et le GM-CSF. L'inhibition de Syk par le R788 entraîne l'inhibition de tous les événements de phosphorylation en aval de la signalisation Syk. Outre la signalisation FcϵRI dans les CHMC, le R788 inhibe le plus puissamment la signalisation des récepteurs IL-4 et IL-2. Le R788 inhibe spécifiquement la signalisation FcγR dans les mastocytes, les macrophages et les neutrophiles humains. Le R788 peut inhiber les lésions inflammatoires locales médiées par les complexes immuns.[1] Le R788 induit l'apoptose de la majorité des lignées cellulaires de DLBCL examinées. Dans les lignées cellulaires de DLBCL sensibles au R788, le R788 inhibe spécifiquement la signalisation BCR induite par le tonus et par le ligand (autophosphorylation de SYK525/526 et phosphorylation SYK-dépendante de la protéine de liaison des cellules B [BLNK]).[2]

L'administration orale de R788 à des souris réduit l'inflammation médiée par les complexes immuns dans une réaction d'Arthus passive inverse et deux modèles d'arthrite induite par des anticorps.[1] Dans une autre étude, le R788 inhibe efficacement la signalisation BCR in vivo, entraînant une prolifération et une survie réduites des cellules B malignes et prolonge significativement la survie des animaux traités.[3] Le R788 démontre une réduction significative des principaux médiateurs inflammatoires tels que le TNFalpha, l'IL-1, l'IL-6 et l'IL-18, conduisant à une inflammation réduite et une dégradation osseuse dans les modèles de polyarthrite rhumatoïde.[4]

• Dosage kinase par polarisation de fluorescence et détermination du Ki

  Les réactions de polarisation de fluorescence sont réalisées. Pour la détermination du K_i, des réactions en double de 200 μL sont préparées à huit concentrations d'ATP différentes à partir de 200 μM (dilutions en série de 2 fois) en présence de DMSO ou de R788 à 125, 62,5, 31,25, 15,5 ou 7,8 nM. À différents moments, 20 μL de chaque réaction sont prélevés et neutralisés pour arrêter la réaction. Pour chaque concentration de R788, la vitesse de réaction à chaque concentration d'ATP est déterminée et tracée en fonction de la concentration d'ATP pour déterminer le K_m et le V_max apparents. Enfin, le K_m apparent (ou K_i/V_max apparent) est tracé en fonction de la concentration d'inhibiteur pour déterminer le K_i.

• Lignées cellulaires

  Cultured human mast cells (CHMC)

• Concentrations

  0-100 μM

• Temps dincubation

  0.5 h

• Méthode

  Cultured human mast cells (CHMC) are derived from cord blood CD34⁺ progenitor cells and grown, primed, and stimulated and shown in supplemental data. Before stimulation, cells are incubated with R788 or DMSO for 30 minutes. Cells are then stimulated with either 0.25 to 2 mg/mL anti-IgE or anti-IgG or 2 μM ionomycin. For tryptase measurement, ~1500 cells per well are stimulated for 30 min in modified Tyrode's buffer. For LTC4 and cytokine production, 100,000 cells per well are stimulated for 1 or 7 hours, respectively. Tryptase activity is measured by luminescence readout of a peptide substrate, and LTC4 and cytokines are measured using Luminex multiplex technology.

• Modèles animaux

  Balb/c mice with arthritis

• Dosages

  1 mg/kg or 5 mg/kg

• Administration

  o.g.