Erlotinib (CP-358774)

L'Erlotinib HCl inhibe puissamment l'activation de l'EGFR dans les cellules intactes, y compris les cellules tumorales de la tête et du cou humaines HNS (IC50 20nM), les cellules de cancer du côlon humain DiFi et les cellules de cancer du sein humain MDA MB-468. Ce composé (1 μM) induit l'apoptose dans les cellules de cancer du côlon humain DiFi. [1] Il inhibe la croissance d'un panel de lignées cellulaires NSCLC, y compris A549, H322, H3255, H358 H661, H1650, H1975, H1299, H596 avec des IC50 allant de 29 nM à >20 μM. [2] Ce produit chimique (2 μM) inhibe significativement la croissance des cellules pancréatiques AsPC-1 et BxPC-3. [3] Les effets de ce composé en combinaison avec la gemcitabine sont considérés comme additifs dans les cellules de cancer du pancréas mutées KRAS. Dix micromolaires de ce produit chimique inhibent la phosphorylation de l'EGFR aux sites Y845 (phosphorylation dépendante de Src) et Y1068 (auto-phosphorylation). [4] La combinaison avec ce composé pourrait moduler à la baisse l'activité Akt stimulée par la rapamycine et produire un effet synergique sur l'inhibition de la croissance cellulaire. [5]

À des doses de 100 mg/kg, l'Erlotinib HCl empêche complètement l'autophosphorylation de l'EGFR induite par l'EGF dans les tumeurs humaines HN5 poussant en xénogreffes chez des souris athymiques et de l'EGFR hépatique des souris traitées. [1] Ce composé (100 mg/Kg) inhibe les modèles tumoraux H460a et A549 avec un taux d'inhibition de 71 et 93 %. [5]

• Tests de kinase

  Des plaques à 96 puits sont recouvertes par incubation pendant une nuit à 37 °C avec 100 μL par puits de 0,25 mg/mL de PGT dans du PBS. L'excès de PGT est retiré par aspiration, et la plaque est lavée 3 fois avec un tampon de lavage (0,1 % de Tween 20 dans du PBS). La réaction de la kinase est effectuée dans 50 μL de 50 mM HEPES (pH 7,3), contenant 125 mM de chlorure de sodium, 24 mM de chlorure de magnésium, 0,1 mM d'orthovanadate de sodium, 20 μM d'ATP, 1,6 μg/mL d'EGF, et 15 ng d'EGFR, purifié par affinité à partir de membranes cellulaires A431. L'Erlotinib HCl dans du DMSO est ajouté pour donner une concentration finale de DMSO de 2,5 %. La phosphorylation est initiée par l'ajout d'ATP et se poursuit pendant 8 minutes à température ambiante, avec une agitation constante. La réaction de la kinase est terminée par aspiration du mélange réactionnel et est lavée 4 fois avec un tampon de lavage. Le PGT phosphorylé est mesuré par 25 minutes d'incubation avec 50 μL par puits d'anticorps anti-phosphotyrosine PY54 conjugué à la HRP, dilué à 0,2 μg/mL dans un tampon de blocage (3 % de BSA et 0,05 % de Tween 20 dans du PBS). L'anticorps est retiré par aspiration, et la plaque est lavée 4 fois avec un tampon de lavage. Le signal colorimétrique est développé par l'ajout de substrat de peroxydase TMB Microwell, 50 μL par puits, et arrêté par l'ajout de 0,09 M d'acide sulfurique, 50 μL par puits. La phosphotyrosine est estimée par mesure de l'absorbance à 450 nm. Le signal pour les contrôles est typiquement de 0,6 à 1,2 unités d'absorbance, avec essentiellement aucun fond dans les puits sans AlP, EGFR ou PGT et est proportionnel au temps d'incubation pendant 10 minutes.

• Lignées cellulaires

  A549, H322, H3255, H358 H661, H1650, H1975, H1299, H596 cells

• Concentrations

  30 nM-20 μM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  Exponentially growing cells are seeded in 96-well plastic plates and exposed to serial dilutions of erlotinib, pemetrexed, or the combination at a constant concentration ratio of 4:1 in triplicates for 72 h. Cell viability is assayed by cell count and the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Growth inhibition is expressed as the percentage of surviving cells in drug-treated versus PBS-treated control cells (which is considered as 100% viability). The IC50 value is the concentration resulting in 50% cell growth inhibition by a 72-h exposure to this compound compared with untreated control cells and is calculated by the CalcuSyn software.

• Modèles animaux

  Male 5-week-old BALB-nu/nu mice with HPAC cells

• Dosages

  50 mg/kg

• Administration

  Oral administration