EPZ005687

EPZ005687 montre une inhibition de l'activité enzymatique de PRC2 dépendante de la concentration avec une valeur IC50 de 54 nM. C'est un inhibiteur direct de l'activité enzymatique de PRC2 et ne fonctionne pas en perturbant les interactions protéine-protéine entre les sous-unités de PRC2. Ce composé se lie dans la poche SAM du domaine SET de EZH2 et est un inhibiteur compétitif du SAM de l'activité enzymatique de EZH2. L'affinité de ce produit chimique est similaire (dans une plage de deux fois) pour les complexes PRC2 contenant EZH2 de type sauvage et mutant Tyr641, mais une affinité significativement plus grande pour l'enzyme mutante A677G (5,4 fois). Il réduit la méthylation de H3K27 dans diverses cellules de lymphome. Il montre une forte cytotoxicité dans les cellules mutantes hétérozygotes Tyr641 ou Ala677, avec des effets minimes sur la prolifération des cellules de type sauvage. Ce composé augmente la phase G1 du cycle cellulaire avec des diminutions corrélatives dans les phases S et G2/M. Dans une lignée cellulaire de lymphome mutante Tyr641, il peut entraîner une dérépression des gènes cibles connus de EZH2 et affecter les gènes spécifiquement réprimés par le mutant Tyr641 de EZH2. [1]

EPZ005687, un inhibiteur sélectif de la méthyltransférase EZH2, inhibe significativement le développement de la PAH induite par le TAC d'une manière dépendante de EZH2-SOD1-ROS.

• Essais enzymatiques biochimiques

  Le composé est incubé pendant 30 min avec 40 μL par puits de 5 nM de PRC2 (la concentration finale de l'essai dans 50 μL est de 4 nM) dans un tampon d'essai 1X (20 mM Bicine [pH 7.6], 0.002% Tween-20, 0.005% Bovine Skin Gelatin et 0.5 mM DTT). 10 μL par puits de mélange de substrat comprenant le tampon d'essai ³ H-SAM, du SAM non marqué, et un peptide représentant les résidus 21-44 de l'histone H3 contenant de la biotine C-terminale (ajoutée à une lysine coiffée d'amide C-terminale) sont ajoutés pour initier la réaction (les deux substrats sont présents dans le mélange réactionnel final à leurs valeurs Km respectives, un format d'essai appelé ‘‘conditions équilibrées’’. Les concentrations finales des substrats et l'état de méthylation du peptide substrat sont indiqués pour chaque enzyme. Les réactions sont incubées pendant 90 min à température ambiante et stoppées avec 10 μL par puits de 600 μM de SAM non marqué, puis transférées dans une plaque flash 384 puits et lavées après 30 min.

• Lignées cellulaires

  OCI-LY19, WSU-DLCL2, Pfeiffer

• Concentrations

  ~10 μM

• Temps dincubation

  11 days

• Méthode

  Plating densities are determined for each cell line on the basis of linear log-phase growth. Cells are counted and split back to the original plating density in fresh medium with EPZ005687 on days 4 and 7.

• Modèles animaux

  Balb/c mice

• Dosages

  10 mg/kg

• Administration

  i.p.