GSK1349572 (Dolutegravir)

Le Dolutegravir (GSK1349572) montre un puissant effet inhibiteur sur neuf isolats cliniques de patients infectés par le VIH-2 naïfs d'inhibiteurs d'integrase avec une EC50 allant de 0,2 nM à 1,4 nM.[1]

In vitro, il inhibe le transfert de brins catalysé par l'Integrase du VIH-1 recombinante avec une IC50 de 2,7 nM. De plus, ce composé inhibe puissamment la réplication du VIH dans des cellules telles que les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC), les cellules MT-4 et les cellules CIP4 infectées par un vecteur lentiviral PHIV auto-inactivant, avec des valeurs d'EC50 de 0,51 nM, 0,71 nM et 2,2 nM, respectivement.[2]

In vitro, il présente également une activité puissante contre cinq virus différents résistants aux inhibiteurs de la transcriptase inverse non nucléosidiques ou résistants aux inhibiteurs de la transcriptase inverse nucléosidiques, avec une EC50 allant de 1,3 nM à 2,1 nM. Similairement à son activité contre le virus de type sauvage, il montre une efficacité équivalente contre deux virus résistants aux inhibiteurs de protéase, avec des valeurs d'EC50 de 0,36 nM et 0,37 nM, respectivement.[2]

Le Dolutegravir (GSK1349572), un médicament antirétroviral (ARV) de première ligne utilisé en polythérapie pour le VIH-1, inhibe l'activité MMP et a le potentiel d'affecter le neurodéveloppement prénatal et postnatal.

• Essai de transfert de brin in vitro

  Les puissances inhibitrices du Dolutegravir (GSK1349572) et d'autres INI sont mesurées dans un essai de transfert de brin utilisant l'Integrase du VIH recombinante. Un complexe d'Integrase et de billes SPA (scintillation proximity assay) enrobées de streptavidine et d'ADN donneur pré-traité biotinylé est formé en incubant 2 μM d'Integrase recombinante purifiée avec 0,66 μM d'ADN donneur biotinylé-4 mg/mL de billes SPA enrobées de streptavidine dans 25 mM d'acide morpholinepropanesulfonique sodique (MOPS) (pH 7,2), 23 mM de NaCl et 10 mM de MgCl₂ pendant 5 minutes à 37 °C. Ces billes sont centrifugées et pré-incubées avec des INI dilués pendant 60 minutes à 37 °C. Ensuite, un substrat d'ADN cible marqué au ₃H est ajouté pour donner une concentration finale de 7 nM de substrat, et le mélange réactionnel de transfert de brin est incubé à 37 °C pendant 25 à 45 minutes, ce qui permet une augmentation linéaire du transfert de brin d'ADN donneur vers l'ADN cible radiomarqué. Le signal est lu à l'aide d'un lecteur de plaques de scintillation Wallac MicroBeta.

• Lignées cellulaires

  MT-4

• Concentrations

  0 to 10 μM

• Temps dincubation

  4 days or 5 days

• Méthode

  Exponentially growing MT-4 cells at a density of 500,000 or 600,000/mL are infected with HIV-1 strain IIIB at a viral multiplicity of infection of 0.001 or a 50% tissue culture infective dose of 4 to 10. The cells are then aliquoted to 96-well plates in the presence of varying concentrations of Dolutegravir (GSK1349572). After incubation for 4 or 5 days, antiviral activity is determined by a cell viability assay that either measured bioluminescence with a CellTiter-Glo luminescent reagent or measured absorbance at 560 and 690 nm using the yellow tetrazolium MTT reagent [3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide].

• Modèles animaux

  C3H/HeJ mice

• Dosages

  50 mg/kg

• Administration

  o.g.