Dihydroethidium

Le Dihydroethidium (DHE, HE, Hydroethidine, PD-MY 003) est une sonde fluorogène bleue perméable aux cellules utilisée pour détecter l'anion radical superoxyde intracellulaire.

1.1 Préparation de la solution mère
Dissoudre 1 mg de Dihydroethidium dans 0,31 mL de DMSO pour obtenir 10 mM de ce composé.
Remarque: Il est recommandé de conserver la solution mère à -20 C ou -80 C à l'abri de la lumière et d'éviter les cycles de congélation-décongélation répétitifs.
1.2 Préparation de la solution de travail de ce produit chimique
Diluer la solution mère dans un milieu de culture cellulaire sans sérum ou du PBS pour obtenir 1-10 M de solution de travail de ce composé.
Remarque: Veuillez ajuster la concentration de la solution de travail de ce produit chimique en fonction de la situation réelle.
Coloration cellulaire
2.1 Pour les cellules en suspension: Centrifuger à 1000 g à 4 C pendant 3-5 minutes, puis jeter le surnageant. Laver deux fois avec du PBS, 5 minutes à chaque fois.
Pour les cellules adhérentes: Jeter le milieu de culture cellulaire et ajouter de la trypsine pour dissocier les cellules afin d'obtenir une suspension unicellulaire. Centrifuger à 1000 g à 4 C pendant 3-5 minutes, puis jeter le surnageant. Laver deux fois avec du PBS, 5 minutes à chaque fois.
2.2 Ajouter 1 mL de solution de travail de ce composé, puis incuber à température ambiante pendant 30 minutes.
2.3 Centrifuger à 400 g à 4 C pendant 3-4 minutes, puis jeter le surnageant.
2.4 Laver deux fois avec du PBS, 5 minutes à chaque fois.
2.5 Resuspendre les cellules avec un milieu de culture cellulaire sans sérum ou du PBS, puis détecter par microscope à fluorescence ou cytomètre en flux.