Silmitasertib (CX-4945)

Silmitasertib (CX-4945) est sélectif pour la CK2, car il n'inhibe que 7 des 238 kinases de plus de 90 % à une concentration de 0,5 μM, ce qui est 500 fois supérieur à l'IC50 de la CK2. Bien que dans les systèmes acellulaires ce composé inhibe FLT3, PIM1 et CDK1 avec une IC50 de 35 nM, 46 nM et 56 nM, respectivement, un traitement à 10 μM est inactif contre FLT3, PIM1 et CDK1 dans les essais fonctionnels basés sur des cellules. Il présente un large spectre d'activité antiproliférative, et les lignées cellulaires de cancer du sein affichent la plus large gamme de sensibilité avec une EC50 de 1,71-20,01 μM. L'activité antiproliférative de CX-4945 est corrélée aux niveaux d'ARNm et de protéines de CK2α, mais pas à la sous-unité catalytique CK2α', à la sous-unité régulatrice CK2β et au statut mutationnel PI3K/Akt ou PTEN. Il inhibe la signalisation PI3K/Akt en bloquant directement la phosphorylation d'Akt à la sérine 129 par CK2 plutôt que par l'activation de PTEN. Le traitement avec ce composé entraîne une phosphorylation réduite de p21 (T145), des niveaux accrus de p21 total et de p27, et l'induction de l'activité caspase 3/7. Il induit un arrêt du cycle cellulaire G2/M dans les cellules BT-474 et un arrêt G1 dans les cellules BxPC-3. Ce composé inhibe la prolifération, la migration et la formation de tubes des HUVEC avec une IC50 de 5,5 μM, 2 μM et 4 μM, respectivement. Dans des conditions hypoxiques dans les cellules BT-474 et BxPC-3, il empêche la régulation négative de p53 et de pVHL et réduit l'activation de la transcription de HIF-1α. [1] Il inhibe puissamment l'activité CK2 intracellulaire endogène avec une IC50 de 0,1 μM dans les cellules Jurkat. [2]

L'administration orale de Silmitasertib (CX-4945) à 25 mg/kg ou 75 mg/kg deux fois par jour présente une puissante activité antitumorale dans le modèle BT-474, avec une TGI de 88% et 97%, respectivement, et 2 animaux sur 9 dans chaque groupe montrant plus de 50% de réduction de la taille de la tumeur par rapport au volume tumoral initial. Dans le modèle BxPC-3, le traitement avec ce composé à 75 mg/kg deux fois par jour montre une TGI de 93% avec 3 animaux n'ayant aucune preuve de tumeur restante à la fin de la période de traitement. [1] Dans le modèle de xénogreffe PC3, l'administration de celui-ci à 25 mg/kg, 50 mg/kg ou 75 mg/kg provoque une inhibition de la croissance tumorale avec une TGI de 19%, 40% et 86%, respectivement. [2]

• Essai kinase CK2

  Le Silmitasertib (CX-4945) est ajouté à un volume de 10 μL à un mélange réactionnel comprenant 10 μL de tampon de dilution d'essai (ADB ; 20 mM MOPS, pH 7,2, 25 mM β-glycérophosphate, 5 mM EGTA, 1 mM orthovanadate de sodium et 1 mM dithiothréitol), 10 μL de peptide substrat (RRRDDDSDDD, dissous dans l'ADB à une concentration de 1 mM), 10 μL de CK2 humaine recombinante (holoenzyme ααββ, 25 ng dissous dans l'ADB). Les réactions sont initiées par l'ajout de 10 μL de solution d'ATP (90% 75 mM MgCl₂, 75 μM ATP (concentration finale d'ATP=15 μM) dissous dans l'ADB ; 10% [γ-³³P]ATP (stock 1 mCi/100 μL ; 3000 Ci/mM et maintenu pendant 10 minutes à 30 °C. Les réactions sont stoppées avec 100 μL d'acide phosphorique à 0,75% puis transférées et filtrées à travers une plaque de filtre à phosphocellulose. Après avoir lavé chaque puits cinq fois avec de l'acide phosphorique à 0,75%, la plaque est séchée sous vide pendant 5 minutes et, après l'ajout de 15 μL de liquide de scintillation dans chaque puits, la radioactivité résiduelle est mesurée à l'aide d'un compteur de luminescence Wallac. Les valeurs d'IC50 pour ce composé sont dérivées de huit concentrations sur une gamme de 0,0001 μM à 1 μM.

• Lignées cellulaires

  SKBr3, MDA-MB-453, BT-474, ZR-75-1, MDA-MB-231, MDA-MB-468, T47D, MCF 7, Hs578T, MDA-MB-361, UACC-812, et al.

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~100 μM

• Temps dincubation

  4 days

• Méthode

  Cells are seeded at a density of 3,000 cells per well 24 hours prior to treatment with Silmitasertib (CX-4945), in appropriate media, and then treated with various concentrations of this compound. Suspensions cells are seeded and treated on the same day. Following 4 days of incubation, Alamar Blue (20 μL, 10% of volume per well) is added and the cells are further incubated at 37 °C for 4-5 hours. Fluorescence with excitation wavelength at 530-560 nm and emission wavelength at 590 nm is measured.

• Modèles animaux

  Female immunocompromised mice CrTac:Ncr-Foxn1nu injected with BxPC-3 or BT-474 cells

• Dosages

  25 or 75 mg/kg

• Administration

  Oral gavage twice daily