Crenolanib (CP-868596)

Le Crenolanib est significativement plus puissant pour inhiber l'activité kinase des kinases PDGFRα résistantes (D842I, D842V, D842Y, D1842-843IM et délétion I843). Ce composé est plus puissant contre D842V dans le système modèle isogénique, avec une IC50 d'environ 10 nM. Il inhibe l'activité kinase de l'oncogène de fusion dans la lignée cellulaire EOL-1, qui est dérivée d'un patient atteint de leucémie éosinophile chronique et exprime la kinase de fusion FIP1L1-PDGFRα constitutivement activée, avec une IC50 = 21 nM. Cette substance chimique inhibe également la prolifération des cellules EOL-1 avec une IC50 = 0,2 pM. Elle inhibe l'activation des kinases mutantes V561D ou D842V exprimées dans les cellules BaF3 avec une IC50 de 85 nM ou 272 nM, respectivement. Ce composé inhibe l'activation de PDGFRα dans la lignée cellulaire de cancer du poumon non à petites cellules H1703 qui présente une amplification de 24 fois de la région 4q12 contenant le locus PDGFRα, avec une IC50 de 26 nM. [1]

C'est un inhibiteur de TKI PDGFR hautement puissant et sélectif, biodisponible par voie orale. Ce composé de benzimidazole a des IC50 de 0,9 nM et 1,8 nM pour PDGFRA et PDGFRB, respectivement. [2]

Ce composé, un inhibiteur de PDGFR, supprime la prolifération des cellules cancéreuses du poumon et inhibe la croissance tumorale in vivo

• Évaluation biochimique de l'activité kinase de PDGFRα

  Des cellules ovariennes de hamster chinois (CHO) sont transfectées transitoirement avec des constructions PDGFRα mutées ou de type sauvage et traitées avec diverses concentrations de Crenolanib. Les expériences impliquant de l'ADN recombinant sont réalisées dans des conditions de niveau de biosécurité 2 conformément aux directives. Des lysats protéiques de lignées cellulaires sont préparés et soumis à une immunoprécipitation à l'aide d'anticorps anti-PDGFRα, suivie d'un immunobuvardage séquentiel pour PDGFRα. La densitométrie est réalisée pour quantifier l'effet du médicament à l'aide du logiciel Photoshop, le niveau de phosphor-PDGFRα étant normalisé par rapport à la protéine totale. Les résultats expérimentaux de densitométrie et de prolifération sont analysés à l'aide du logiciel Calcusyn 2.1 pour déterminer mathématiquement les valeurs d'IC50. Le test de somme des rangs de Wilcoxon est utilisé pour comparer les valeurs d'IC50 de ce composé pour une mutation donnée.

• Lignées cellulaires

  EOL-1 cell line

• Concentrations

  0-20 pM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  Cells are added to 96-well plates at densities of 20, 000 cells/well and incubated with Crenolanib for 72 hours before measuring cellular proliferation using a 2,3-bis[2-methoxyl-4-nitro-5-sulfophenyl]-2H-tetrazolium-5-carboxanilide (XTT)-based assay.