CP-91149

CP-91149 présente une activité inhibitrice 200 fois plus élevée contre la glycogène phosphorylase a du foie humain (HLGPa) que la caféine (IC50 = 26 μM). Ce composé (10-100 μM) inhibe la glycogénolyse stimulée par - dans les hépatocytes isolés de rat de manière dose-dépendante, et dans les hépatocytes humains primaires avec une IC50 d'environ 2,1 μM. [1] Il inhibe également puissamment les activités de la phosphorylase a et b du muscle humain avec des IC50 respectives de 0,2 μM et environ 0,3 μM. Le traitement avec cette substance chimique à 2,5 μM induit l'inactivation de la phosphorylase et l'activation séquentielle de la glycogène synthase dans les hépatocytes, et augmente la synthèse de glycogène de 7 fois à 5 mM de glucose et de 2 fois à 20 mM de glucose. Il peut partiellement contrecarrer les effets de la surexpression de la phosphorylase. [2] Ce composé inhibe également puissamment la GP cérébrale avec une IC50 de 0,5 μM dans les cellules A549. Le traitement à 10-30 μM provoque une accumulation significative de glycogène dans les cellules A549 et HSF55. Le traitement augmente les cellules en phase G1 avec une réduction significative de la population en phase S dans les cellules HSF55, corrélée à une expression accrue de p21 et p27. [3] Cette substance chimique favorise également la déphosphorylation et l'activation de la GS (glycogen synthase) dans les cellules musculaires humaines cultivées non modifiées ou surexprimant la GP, mais exclusivement dans les cellules privées de glucose. [4]

L'administration orale de CP-91149 à des souris diabétiques ob/ob à 25-50 mg/kg provoque une baisse rapide (3 heures) du glucose de 100-120 mg/dl sans produire d'hypoglycémie, résultant de l'inhibition de la glycogénolyse in vivo. Le traitement avec ce composé ne diminue pas les niveaux de glucose chez les souris normoglycémiques non diabétiques. [1] Chez les rats Goto-Kakizaki (GK) non à jeun, l'administration de cette substance chimique en association avec CS-917 supprime la réduction du glycogène hépatique par CS-917 et diminue le glucose plasmatique plus qu'une administration unique de CS-917. [5]

• Test enzymatique de la Phosphorylase

  L'activité de la glycogène phosphorylase a du foie humain (HLGPa, 85 ng) est mesurée dans le sens de la synthèse du glycogène par la libération de phosphate à partir de glucose-1-phosphate à 22°C dans 100 μL de tampon contenant 50 mM Hepes (pH 7.2), 100 mM KCl, 2.5 mM EGTA, 2.5 mM MgCl₂, 0.5 mM glucose-1-phosphate et 1 mg/mL de glycogène. Le phosphate est mesuré à 620 nm, 20 minutes après l'ajout de 150 μL de HCl 1 M contenant 10 mg/mL de molybdate d'ammonium et 0.38 mg/mL de vert malachite. Des concentrations croissantes de ce composé sont ajoutées à l'essai dans 5 μL de DMSO à 14 %.

• Lignées cellulaires

  HSF55 and T98G

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~50 μM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  Cells are exposed to various concentrations of CP-91149 for 72hours. Viability is determined with manual cell counts following staining with trypan blue exclusion assay. Cells are fixed with 70% ethanol. DNA is stained with propidium iodide and the intensity of fluorescence is measured using a Becton-Dickinson flow cytometer at 488nm for excitation and at 650nm for emission. The cell cycle profile is analyzed using Modifit's Sync Wizard.

• Modèles animaux

  Obese, diabetic male C57BL/6J-Lep^(ob/ob) mice and their lean, nondiabetic C57BL/6J-/+ littermates

• Dosages

  ~50 mg/kg

• Administration

  Orally