AZD5363 (Capivasertib)

Le Capivasertib (AZD5363) est un puissant inhibiteur de l'Akt avec des IC50 de 3 nM, 8 nM et 8 nM pour Akt1, Akt2 et Akt3, respectivement. [1] Il inhibe la phosphorylation des substrats d'AKT dans les cellules avec une puissance d'environ 0,3 à 0,8 μM. Ce composé inhibe la prolifération de 41 des 182 lignées cellulaires tumorales solides et hématologiques avec une puissance < 3 μM. [2] Les mutations activatrices de PIK3CA, la perte ou l'inactivation du suppresseur de tumeur PTEN, ou l'amplification de HER2 sont toutes significativement prédictives de la réactivité à AZD5363. De plus, une corrélation est également observée entre le statut de mutation RAS des lignées cellulaires et la résistance à celui-ci. [1]

L'administration orale de Capivasertib (AZD5363) (100, 300 mg/kg) à des souris nues entraîne une réduction dose- et temps-dépendante de la phosphorylation de PRAS40, GSK3β et S6 dans les xénogreffes BT474c, des augmentations réversibles des concentrations de glucose sanguin et des diminutions dose-dépendante de l'absorption de 2[¹⁸F]fluoro-2-déoxy-d-glucose (¹⁸F-FDG) dans les xénogreffes U87-MG. L'administration orale chronique de ce composé (130, 200 et 300 mg/kg) provoque une inhibition de la croissance dose-dépendante des xénogreffes dérivées de divers types de tumeurs, y compris les modèles de cancer du sein HER2+.

• Test de décalage de mobilité par incubation hors puce Caliper

  La capacité du Capivasertib (AZD5363) et d'autres composés à inhiber l'activité d'AKT1, AKT2 et AKT3 est évaluée par le test de décalage de mobilité par incubation hors puce Caliper. Les AKT1, AKT2 ou AKT3 recombinantes actives sont incubées avec un substrat peptidique synthétisé sur mesure, marqué au 5-FAM, avec des concentrations croissantes de ce composé. Les réactions finales contenaient 1 à 3 nM d'enzymes AKT1, AKT2 ou AKT3 ; 1,5 mM de substrat peptidique ; de l'ATP à K _m pour chaque isoforme d'AKT ; 10 mM de MgCl₂, 4 mM de DTT, 100 mM de HEPES et 0,015 % de Brij-35. Les réactions sont incubées à température ambiante pendant 1 heure et arrêtées par l'ajout d'un tampon contenant 100 mM de HEPES, 0,015 % de solution de Brij-35, 0,1 % de réactif de revêtement, 40 mM d'EDTA et 5 % de DMSO. Les plaques sont ensuite analysées à l'aide d'un Caliper LC3000, permettant la séparation du substrat peptidique et du produit phosphorylé par électrophorèse avec détection et quantification ultérieures de la fluorescence induite par laser.

• Lignées cellulaires

  182 solid and hematologic tumor cell lines

• Concentrations

  ~30 μM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  Cell proliferation assay is determined by 2 methods, MTS and Sytox Green, using Capivasertib (AZD5363). Briefly, cells are seeded in 96-well plates and incubated overnight at 37 ℃, 5% CO₂. Cells are then exposed to concentrations of this compound ranging from 30 to 0.003μM for 72 hours. For the MTS endpoint, cell proliferation is measured by the CellTiter AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay reagent in accordance with the manufacturer's protocol. For the Sytox Green endpoint, Sytox Green nucleic acid dye diluted in TBS-EDTA buffer is added to cells (final concentration of 0.13 μM) and the number of dead cells detected using an Acumen Explorer. Cells are then permeabilized by the addition of saponin (0.03% final concentration, diluted in TBS-EDTA buffer), incubated overnight and a total cell count measured. Predose measurements are made for both MTS and Sytox Green endpoints, and concentration needed to reduce the growth of treated cells to half that of untreated cells values are determined using absorbance readings (MTS) or live cell counts.

• Modèles animaux

  Female nude mice and male SCID mice with BT474c, U87MG, KPL-4, HCC-1187 xenografts.

• Dosages

  130 mg/Kg - 300 mg/Kg

• Administration

  p.o.