BI 2536

BI 2536 bloque les activités de Plk2 et Plk3 dans une moindre mesure avec des IC50 de 3,5 nM et 9,0 nM, respectivement. Dans les cellules HeLa, ce traitement composé allant de 10 à 100 nM entraîne le blocage du recrutement de la γ-tubuline et la phosphorylation d'Apc6 aux centrosomes mitotiques, l'inhibition de la libération de la cohésine des bras chromosomiques, l'induction de fuseaux monopolaires, ainsi qu'une gamme d'autres processus mitotiques dont on sait qu'ils dépendent de Plk1. Ce traitement chimique conduit à l'arrêt des cellules HeLa en G2/M, puis à un pic d'ADN sub-G1 indiquant une dégradation de l'ADN et une Apoptosis, et à l'accumulation de fragments de PARP p85 clivés de manière concentration-dépendante. Il inhibe la croissance d'un panel de 32 lignées de cellules cancéreuses humaines avec des EC50 de 2-25 nM, tout en bloquant la prolifération des cellules hTERT-RPE1 en croissance exponentielle, des cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVECs) et des cellules rénales de rat normales (NRK) avec des EC50 de 12-31 nM. [1] L'inhibition de Plk1 par ce composé réduit la croissance et la viabilité des cellules de carcinome thyroïdien anaplasique (ATC) telles que CAL62, OCUT-1, SW1736, 8505C et ACT-1 avec des valeurs d'EC50 de 1,4-5,6 nM. [2]

Administré par voie intraveineuse une ou deux fois par semaine, BI 2536 est très efficace dans divers modèles de xénogreffes avec une tolérance acceptable en inhibant la prolifération cellulaire par un arrêt mitotique, et par la suite en induisant la mort des cellules tumorales. L'administration de ce composé à 50 mg/kg une ou deux fois par semaine inhibe significativement la croissance des xénogreffes HCT 116 avec un T/C de 15% et 0,3% respectivement. Ce traitement chimique deux fois par semaine entraîne également une excellente croissance tumorale dans les modèles BxPC-3 et A549 avec un T/C de 5% et 14% respectivement. [1]

• Essai kinase in vitro de Plk1

  La Plk1 humaine recombinante (résidus 1-603) est exprimée sous forme de protéine de fusion N-terminale, étiquetée GST, avec un système d'expression baculoviral et purifiée par chromatographie d'affinité avec de l'agarose-glutathion. Les tests d'activité enzymatique pour Plk1 sont effectués en présence de BI 2536 dilué en série avec 20 ng de kinase recombinante et 10 μg de caséine de lait bovin comme substrat. Les réactions de kinase sont effectuées dans un volume final de 60 μL pendant 45 minutes à 30 °C (15 mM MgCl₂, 25 mM MOPS [pH 7.0], 1 mM DTT, 1% DMSO, 7.5 mM ATP, 0.3 μCi γ-³³P-ATP). Les réactions sont terminées par l'ajout de 125 μL de TCA à 5% glacé. Après transfert des précipités sur des plaques filtrantes en cellulose à ester mixte Multi-Screen, les plaques sont lavées avec 1% de TCA et quantifiées radiométriquement. La courbe dose-réponse est utilisée pour calculer la valeur IC50.

• Lignées cellulaires

  HeLa, A43, SKOV-3, HT-29, K562, A549, Saos-2, MCF7, HCT116, COLO 205, Hep G2, Raji and PC-3 cells, etc.

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Temps dincubation

  24 and 72 hours

• Méthode

  Cells are exposed to various concentrations of BI 2536 for 24, and 72 hours. Cell growth is assessed by the measurement of Alamar Blue dye conversion in a fluorescence spectrophotometer. For determining the DNA content of the cultures, cell suspensions are fixed in 80% ethanol, treated for 5 minutes with 0.25% Triton X-100 in PBS, and incubated with 0.1% RNase and 10 μg/mL propidium iodide (PI) in PBS for 20 minutes at RT. Cell-cycle profiles are determined by flow cytometric analysis.

• Modèles animaux

  Female BomTac:NMRI-Foxn1^nu mice injected subcutaneously with HCT 116, NCI-H460, or A549 cells

• Dosages

  ~50 mg/kg

• Administration

  Injection i.v. once or twice per week