Bardoxolone Methyl (RTA 402)

Le Bardoxolone Methyl présente de puissantes activités inhibitrices contre la production d'oxyde nitrique induite par l'interféron-Ƴ dans les macrophages de souris avec une CI50 de 0,1 nM. [1] Ce composé diminue la viabilité des cellules leucémiques HL-60, KG-1 et NB4 avec une CI50 de 0,4, 0,4 et 0,27 μM, respectivement. Il induit la protéine pro-apoptotique Bax, inhibe l'activation d'ERK1/2 et bloque la phosphorylation de Bcl-2, ce qui contribue à l'induction de l'apoptosis. [2] Ce produit chimique inhibe puissamment à la fois le NF-kappaB constitutif et inductible activé par le TNF, l'interleukine (IL)-1beta, l'ester de phorbol, l'acide okadaïque, le peroxyde d'hydrogène, le lipopolysaccharide et la fumée de cigarette. [3]

Le Bardoxolone Methyl (60 mg/kg) réduit le nombre, la taille et la gravité des tumeurs pulmonaires in vivo. [4] Ce composé réduit significativement la réponse inflammatoire cytokinique in vivo après un défi LPS, induit l'expression de la protéine HO-1 dans la rate et protège les souris contre une dose létale de LPS. [5]

• Test IKK

  Pour déterminer l'effet du CDDO-Me sur l'activation d'IKK induite par le TNF, l'IKK est analysée. En bref, le complexe IKK des extraits de cellules entières a été précipité avec un anticorps anti-IKKα et IKKβ, puis traité avec des billes de Protéine A/G-Sepharose. Après 2 heures, les billes sont lavées avec un tampon de lyse puis resuspendues dans un mélange d'essai de kinase contenant 50 mmol/L d'HEPES (pH 7.4), 20 mmol/L de MgCl₂, 2 mmol/L de DTT, 20 μCi de [γ-³²P]ATP, 10 μmol/L d'ATP non marqué et 2 μg du substrat glutathion S-transférase-IκBα (acides aminés 1-54). Après incubation à 30°C pendant 30 minutes, la réaction est arrêtée par ébullition avec un tampon d'échantillon SDS pendant 5 minutes. Enfin, la protéine est résolue sur un gel SDS-PAGE à 10%, le gel est séché et les bandes radioactives sont visualisées avec un Storm820. Pour déterminer les quantités totales d'IKK-α et d'IKK-β dans chaque échantillon, 50 μg de protéines de cellules entières sont résolues sur un gel SDS-PAGE à 7,5%, électrotransférées sur une membrane de nitrocellulose, puis transférées avec un anticorps anti-IKK-α ou anti-IKK-β.

• Lignées cellulaires

  HL-60, KG-1, and NB4 cells

• Concentrations

  ~5 μM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  Leukemic cell lines are cultured at a density of 3.0 × 10⁵ cells/mL, and AML mononuclear cells are cultured at 5 × 10⁵ cells/mL in the presence or absence of indicated concentrations of this compound. Appropriate amounts of DMSO (final concentration less than 0.05%) are included as control. For cytotoxicity studies, 1 μM ara-C is added to the cultures. After 24 to 72 hours, viable cells are counted with the trypan blue dye exclusion method using a hematocytometer.

• Modèles animaux

  Female A/J mice are injected i.p. with vinyl carbamate.

• Dosages

  ~60 mg/kg

• Administration

  Oral gavage