AT7519 HCl

N° de catalogueS7808 Lot:S780801

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Données techniques

Formule

C16H18Cl3N5O2
Poids moléculaire 418.71 N° CAS 902135-91-5
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 52 mg/mL (124.19 mM)
Water 43 mg/mL (102.69 mM)
Ethanol 28 mg/mL (66.87 mM)
In Vivo (Ajoutez les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
Saline

Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.

 30.000mg/ml (71.65mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 30 mg of this product to 1 ml of physiological saline (0.9% NaCL solution), mix evenly to make it clear, The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description AT7519 HCl est un inhibiteur multi-CDK pour CDK1, 2, 4, 6 et 9 avec une IC50 de 10-210 nM dans les essais sans cellules. Il est moins puissant pour CDK3 et peu actif pour CDK7. Phase 2.
Cibles
CDK9/CyclinT
(Cell-free assay)		 CDK5/p35
(Cell-free assay)		 CDK2/CyclinA
(Cell-free assay)		 GSK-3β
(Cell-free assay)		 CDK4/CyclinD1
(Cell-free assay)		 Voir plus
<10 nM 13 nM 47 nM 89 nM 100 nM
In vitro AT7519 est un inhibiteur de CDK compétitif de l'ATP avec une valeur Ki de 38 nM pour CDK1. AT7519 est inactif contre toutes les kinases non-CDK à l'exception de GSK3β (IC50 = 89 nM). AT7519 montre une puissante activité antiproliférative dans une variété de lignées cellulaires tumorales humaines avec des valeurs IC50 allant de 40 nM pour MCF-7 à 940 nM pour SW620, ce qui est cohérent avec l'inhibition de CDK1 et CDK2. AT7519 induit une cytotoxicité dose-dépendante dans les lignées cellulaires de myélome multiple (MM) avec des valeurs IC50 allant de 0,5 à 2 μM à 48 heures, les lignées cellulaires les plus sensibles étant MM.1S (0,5 μM) et U266 (0,5 μM) et la plus résistante MM.1R (>2 μM). Il n'induit pas de cytotoxicité dans les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMNC). AT7519 surmonte partiellement l'avantage prolifératif conféré par l'IL6 et l'IGF-1 ainsi que l'effet protecteur des cellules stromales de la moelle osseuse (BMSCs). AT7519 induit une déphosphorylation rapide de l'ARN pol II CTD aux sites sérine 2 et sérine 5, et conduit à l'inhibition de la transcription, contribuant partiellement à la cytotoxicité induite par AT7519 des cellules MM. AT7519 induit l'activation de GSK-3β en régulant à la baisse la phosphorylation de GSK-3β, ce qui contribue également à l'apoptose induite par AT7519 indépendamment de l'inhibition de la transcription.
In Vivo Une administration biquotidienne d'AT7519 (9,1 mg/kg) provoque une régression tumorale des tumeurs sous-cutanées à un stade précoce et avancé dans les modèles de xénogreffe de cancer du côlon HCT116 et HT29. Le traitement par AT7519 (15 mg/kg) inhibe la croissance tumorale et prolonge la survie globale médiane des souris dans le modèle murin de xénogreffe de MM humain en association avec une activation accrue de la caspase 3.

Protocole (de référence)

Test kinase :[1]
  • Tests kinases in vitro

    Les tests kinases pour CDK1, CDK2 et GSK3-β sont tous réalisés sous format de liaison par filtration radiométrique. Les tests pour CDK5 sont au format DELFIA et pour CDK4 et 6 au format ELISA. Pour CDK1 et 2, la CDK pertinente et 0,12 μg/mL d'histone H1 sont incubés dans 20 mM MOPS, pH 7,2, 25 mM β-glycérophosphate, 5 mM EDTA, 15 mM MgCl2, 1 mM orthovanadate de sodium, 1 mM DTT, 0,1 mg/mL BSA, 45 μM ATP (0,78 Ci/mmol) et différentes concentrations d'AT7519 pendant 2 ou 4 heures respectivement. Pour GSK3-β, l'enzyme pertinente et 5 μM de peptide de glycogène synthase 2 ainsi que 10 mM MOPS pH 7,0, 0,1 mg/mL BSA, 0,001% Brij-35, 0,5% glycérol, 0,2 mM EDTA, 10 mM MgCl2, 0,01% β-mercaptoéthanol, 15 μM ATP (2,31 Ci/mmol) et différentes concentrations d'AT7519 sont incubés pendant 3 heures. Les réactions des tests sont arrêtées par l'ajout d'un excès d'acide orthophosphorique et filtrées à l'aide de plaques filtrantes Millipore MAPH. Les plaques sont ensuite lavées, un scintillant est ajouté et la radioactivité est mesurée par comptage de scintillation sur un Packard TopCount. Pour CDK5, CDK5/p35 et 1μM d'un peptide d'histone H1 biotinylé (Biotin-PKTPKKAKKL) sont incubés dans 25 mM Tris-HCl, pH 7,5, 2,5 mM MgCl2, 0,025% Brij-35, 0,1 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 15 μM ATP et différentes concentrations d'AT7519 pendant 30 minutes. Les réactions des tests sont arrêtées à l'aide d'EDTA, transférées sur des plaques recouvertes de Neutravidine et le peptide phosphorylé est quantifié au moyen d'un anticorps polyclonal anti-substrat phospho-cdk1 de lapin et d'un anticorps secondaire anti-IgG de lapin marqué à l'europium DELFIA en utilisant la fluorescence résolue dans le temps à λex=335nm, λem=620nm. Pour les tests CDK 4 et 6, les plaques sont recouvertes de GST-pRb769-921 et bloquées avec Superblock. CDK4 ou 6 est incubé avec 15 mM MgCl2, 50 mM HEPES, pH 7,4, 1 mM DTT, 1 mM EGTA, pH 8,0, 0,02% Triton X-100, 2,5% DMSO et différentes concentrations d'AT7519 ; la réaction est initiée par l'ajout d'ATP. Après 30 minutes, les réactions sont arrêtées par l'ajout de 0,5 M EDTA pH 8,0. Les plaques sont ensuite lavées et incubées pendant une heure avec l'anticorps primaire (anti-p-Rb Sérine 780) dilué dans Superblock, suivi de l'anticorps secondaire (anti-lapin lié à la phosphatase alcaline) pendant une heure supplémentaire. Les plaques sont développées à l'aide du système Attophos et la fluorescence est lue sur un lecteur de plaques Spectramax Gemini à une excitation de 450 nm et une émission de 580 nm. Dans tous les cas, les valeurs IC50 sont calculées à partir de courbes répétées, à l'aide du logiciel GraphPad Prism.
Test cellulaire :[2]
  • Lignées cellulaires

    MM.1S, MM.1R, RPMI8226, U266, RPMI8266, RPMI-Dox40, OPM1 cells, primary MM cells and PBMNCs

  • Concentrations

    Dissolved in DMSO at a concentration of 10 mM, final concentrations 0.25-4 μM

  • Temps dincubation

    24 or 48 hours

  • Méthode

    Cells are incubated with different concentrations of AT7519 for 24 or 48 hours at 37°C. Cell viability is assessed by measuring 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl tetrasodium bromide (MTT) dye absorbance. DNA synthesis is measured by tritiated thymidine uptake (3H-TdR). Apoptosis is assessed by using Annexin V/PI staining. The percentage of cells undergoing apoptosis is defined as the sum of early apoptosis (Annexin V-positive cells) and late apoptosis (Annexin V-positive and PI-positive cells
Étude animale :[2]
  • Modèles animaux

    Male SCID mice inoculated subcutaneously with MM.1S cells

  • Dosages

    15 mg/kg/day

  • Administration

    Dosed i.p.

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19174555/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20101221/

Validation du produit par le client

(c) Effect of AT7519 treatment on RNA pol II occupancy at the PRCC gene. MM1.S cells were treated with either DMSO vehicle (blue) or 2 μM AT7519 (brown) for 6 h, followed by RNA pol II ChIP-seq analysis. Twenty-fold magnifications of the rpm/bp scale of these gene tracks are shown in the right panel to show the difference in reads for elongating RNA pol II. TR, RNA pol II traveling ratio.(d) Genome-wide binding average RNA pol II (ChIP-seq) on active promoters and gene bodies following treatment of MM1.S cells with DMSO vehicle (blue) or 2 μM of AT7519 (brown) for 6 h. Magnification of the rpm/bp scale at gene bodies is shown in the inset. The inset includes RNA polymerase II traveling ratio distributions (TR, mean) derived from MM1.S cells treated with DMSO (blue) or 2 μM AT7519 (red).(e) Chemical structures of the pan-CDK inhibitor AT7519 and its biotinylated counterpart bio-AT7519.(f) In vitro kinase assays with recombinant cyclin T-CDK9 complex in the presence of increasing concentrations of AT7519 or bio-AT7519. The derived IC50 values for each compound are shown.(g) Effect of AT7519 and bio-AT7519 on MM1.S cell proliferation. Cells were treated with varying concentrations of drug for 72 h as indicated. The derived EC50 values for each compound are shown.

Données de [ , , Nat Biotechnol, 2014, 32(1): 92-96. ]

(C) Western blot analyses following treatment with the indicated doses of cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitors for apoptosis markers, poly(ADP-ribose) polymerase 1 (PARP-1), caspase 3, cleaved form of caspase 3 and β-actin.

Données de [ , , Int J Oncol, 2018, 53(2):703-712 ]

De Selleck AT7519 HCl A été cité par 12 Publications

Interleukin-15 enhanced the survival of human γδT cells by regulating the expression of Mcl-1 in neuroblastoma [ Cell Death Discov, 2022, 8(1):139] PubMed: 35351861
O-GlcNAc transferase maintains metabolic homeostasis in response to CDK9 inhibition [ Glycobiology, 2022, cwac038] PubMed: 35708495
Cdk2 suppresses IL-23 expression and the onset of severe acute pancreatitis [ Immun Inflamm Dis, 2022, 10(6):e631] PubMed: 35634959
High-content image-based analysis and proteomic profiling identifies Tau phosphorylation inhibitors in a human iPSC-derived glutamatergic neuronal model of tauopathy [ Sci Rep, 2021, 11(1):17029] PubMed: 34426604
The cyclin-dependent kinase inhibitor AT7519 augments cisplatin's efficacy in ovarian cancer via multiple oncogenic signaling pathways [ Fundam Clin Pharmacol, 2021, 10.1111/fcp.12709] PubMed: 34212421
Development of a miRNA-controlled dual-sensing system and its application for targeting miR-21 signaling in tumorigenesis [ Exp Mol Med, 2020, 10.1038/s12276-020-00537-z] PubMed: 33311703
Inhibition of Cyclin-dependent Kinase (CDK) Decreased Survival of NB4 Leukemic Cells: Proposing a p53-Independent Sensitivity of Leukemic Cells to Multi-CDKs Inhibitor AT7519 [ Iran J Pharm Res, 2020, 19(3):144-155] PubMed: 33680018
Fibroblast growth factor receptor influences primary cilium length through an interaction with intestinal cell kinase [ Proc Natl Acad Sci U S A, 2019, 116(10):4316-4325] PubMed: 30782830
CDK Blockade Using AT7519 Suppresses Acute Myeloid Leukemia Cell Survival through the Inhibition of Autophagy and Intensifies the Anti-leukemic Effect of Arsenic Trioxide [ Iran J Pharm Res, 2019, 18(Suppl1):119-131] PubMed: 32802093
Frequent Genetic Aberrations in the CDK4 Pathway in Acral Melanoma Indicate the Potential for CDK4/6 Inhibitors in Targeted Therapy [Kong Y Clin Cancer Res, 2018, 23(22):6946-6957] PubMed: 28830923

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