AMG-900

AMG 900 est une nouvelle classe d'inhibiteurs de petites molécules de phtalazinamine compétitifs de l'ATP des aurora kinases. Dans les cellules HeLa, AMG 900 inhibe l'autophosphorylation d'aurora-A et -B ainsi que la phosphorylation de l'histone H3 sur la sérine, un substrat proximal d'aurora-B. La réponse cellulaire prédominante des cellules tumorales au traitement par AMG 900 est une division cellulaire avortée sans arrêt mitotique prolongé, ce qui entraîne finalement la mort cellulaire. AMG 900 inhibe la prolifération de 26 lignées cellulaires tumorales, y compris des lignées cellulaires résistantes à d'autres inhibiteurs d'aurora kinase (AZD1152, MK-0457 et PHA-739358), à de faibles concentrations nanomolaires (environ 2-3 nM). De plus, AMG 900 est actif dans une lignée cellulaire variante HCT116 résistante à l'AZD1152 qui héberge une mutation d'aurora-B (W221L). [1]

L'administration orale d'AMG 900 bloque la phosphorylation de l'histone H3 de manière dose-dépendante et a significativement inhibé la croissance des xénogreffes tumorales HCT116. AMG 900 est largement actif dans plusieurs modèles de xénogreffes, y compris 3 modèles de xénogreffes multirésistantes, représentant 5 types de tumeurs. [1] AMG 900 présente une clairance faible à modérée et un faible volume de distribution. Sa demi-vie d'élimination terminale variait de 0,6 à 2,4 heures. AMG 900 est bien absorbé chez les animaux à jeun avec une biodisponibilité orale de 31% à 107%. L'apport alimentaire a un effet sur le taux (rats) ou l'étendue (chiens) de l'absorption orale d'AMG 900. La clairance et le volume de distribution à l'état d'équilibre chez l'homme sont prédits à 27,3 mL/h/kg et 93,9 mL/kg, respectivement. AMG 900 présente des propriétés PK acceptables chez les espèces précliniques et devrait avoir une faible clairance chez l'homme. [2]

• Tests enzymatiques kinases

  Les protéines aurora-A (TPX2) et aurora-B recombinantes marquées GST- ou His- sont exprimées à l'aide d'un système baculovirus et purifiées par chromatographie d'affinité. L'activité de l'AMG 900 est évaluée à l'aide d'un test standardisé de fluorescence homogène résolue dans le temps (HTRF). Des tests enzymatiques pour 24 autres kinases (aurora-C, p38α, TYK2, JNK2, JAK3, c-Met, VEGFR2, p38β, TIE-2, ABL (T315I), ERK1, BTK, JNK3, CDK5, PKAα, JNK1, p70S6K, PKBα, MSK1, LCK, SRC, IGFR, JAK2 et c-KIT) sont effectués en interne de manière similaire. Les concentrations d'enzyme, de substrat peptidique et d'ATP dans la réaction sont optimisées en fonction de l'activité spécifique de la kinase et des valeurs de K_m mesurées pour leurs substrats correspondants. L'AMG 900 est évalué dans un test de liaison compétitive du kinome (n = 353 kinases uniques) par Ambit Biosciences. L'AMG 900 est initialement criblé à une concentration unique de 1000 nM, et les constantes de liaison quantitatives (Kd) sont déterminées pour chaque hit positif (< 20 pourcentage du contrôle).

• Lignées cellulaires

  Different tumor cell lines including NCI-H460, MDA-MB231, MES-SA, NCI-H460 PTX, MDA-MB-231 PTX, MES-SA Dx5, and HCT-15.

• Concentrations

  0.5, 5.0, 50 nM

• Temps dincubation

  48 hours

• Méthode

  Tumor cells are treated with AMG 900 for 48 hours, washed twice with complete media, and cells are replated at a density of 5000 cells per well in drug-free complete media. Cells are grown until the DMSO control wells are confluent. Cells are stained with crystal violet dye, washed with distilled water, and imaged using a digital scanner.

• Modèles animaux

  Nude mice bearing established HCT116 tumors

• Dosages

  3.75, 7.5, or 15 mg/kg

• Administration

  Orally administered