SRT1720 HCl

Le rapport d'activation maximal du SRT1720 par rapport aux homologues de sirtuin les plus proches, SIRT2 (EC1.5 = 37 μM) et SIRT3 (EC1.5 > 300 μM) atteint jusqu'à 781 %. Le SRT1720 se lie au complexe enzyme-substrat peptidique SIRT1 sur un site allostérique amino-terminal au domaine catalytique et abaisse la constante de Michaelis pour les substrats acétylés. Le SRT1720 pourrait réduire les niveaux de glucose post-prandial.  Le SRT1720 n'a pas d'effet sur la glycémie à jeun chez les souris nourries avec un régime standard, révélant que l'activation pharmacologique de SIRT1 est peu susceptible d'induire une hypoglycémie. Le SRT1720 réduit significativement l'hyperinsulinémie après 4 semaines, normalisant partiellement les niveaux d'insuline augmentés. Le traitement au SRT1720 augmente la capacité mitochondriale de 15 % dans le muscle gastrocnémien, mesurée par l'activité de la citrate synthase. [1] Des concentrations plus élevées de SRT1720 (15 μM) induisent une diminution modeste (10-20 %) de la viabilité des cellules normales. Le SRT1720 inhibe également significativement la migration des cellules MM dépendante du VEGF. [2]

Chez les souris DIO, le SRT1720 mime plusieurs des effets observés après une restriction calorique, notamment une amélioration de la sensibilité à l'insuline, des niveaux de glucose et d'insuline normalisés et une augmentation de la capacité mitochondriale. De plus, chez les souris obèses induites par le régime alimentaire et les souris génétiquement obèses, le SRT1720 améliore la sensibilité à l'insuline, abaisse la glycémie plasmatique et augmente la capacité mitochondriale. Ainsi, le SRT1720 est un nouvel agent thérapeutique prometteur pour le traitement des maladies liées au vieillissement telles que le diabète de type 2. Conformément à l'amélioration de la tolérance au glucose, le taux de perfusion de glucose requis pour maintenir l'euglycémie est environ 35 % plus élevé chez les rats fa/fa traités par SRT1720, et le taux d'élimination totale du glucose est augmenté d'environ 20 %. [1] Le SRT1720 prévient également la croissance tumorale du myélome multiple. 

• Essai de polarisation de fluorescence SIRT1

  Dans l'essai FP de SIRT1, l'activité de SIRT1 est surveillée à l'aide d'un peptide de 20 acides aminés (Ac-Glu-Glu-Lys(biotin)-Gly-Gln-Ser-Thr-Ser-Ser-His-Ser-Lys(Ac)-Nle-Ser-Thr-Glu-Gly–Lys(MR121 or Tamra)-Glu-Glu-NH₂) dérivé de la séquence de p53. Le peptide est lié en N-terminal à la biotine et modifié en C-terminal par un marqueur fluorescent. La réaction pour la surveillance de l'activité enzymatique est un essai enzymatique couplé où la première réaction est la réaction de désacétylation catalysée par SIRT1 et la deuxième réaction est le clivage par la trypsine au niveau du résidu lysine nouvellement exposé. La réaction est arrêtée et la streptavidine est ajoutée afin d'accentuer les différences de masse entre le substrat et le produit. La sensibilité de l'essai FP permet l'identification du SRT1720. Les conditions de la réaction de polarisation de fluorescence sont les suivantes : 0,5 μM de substrat peptidique, 150 μM de βNAD⁺, 0-10 nM de SIRT1, 25 mM de Tris-acétate pH 8, 137 mM de Na-Ac, 2,7 mM de K-Ac, 1 mM de Mg-Ac, 0,05 % de Tween-20, 0,1 % de Pluronic F127, 10 mM de CaCl2, 5 mM de DTT, 0,025 % de BSA et 0,15 mM de nicotinamide. La réaction est incubée à 37 °C et arrêtée par addition de nicotinamide, et la trypsine est ajoutée pour cliver le substrat désacétylé. Cette réaction est incubée à 37 °C en présence de 1 μM de streptavidine. La polarisation fluorescente est déterminée à des longueurs d'onde d'excitation (650 nm) et d'émission (680 nm).

• Lignées cellulaires

  Human vascular endothelial cells (HUVECs)

• Concentrations

  5 μM

• Temps dincubation

  2 hours

• Méthode

  Transwell Insert Assays are utilized to measure migration. In vitro angiogenesis is assessed by Matrigel capillary-like tube structure formation assay. For endothelial tube formation assay, human vascular endothelial cells (HUVECs) are obtained from Clonetics and maintained in endothelial cell growth medium-2 containing 5% FBS. After three passages, HUVEC cell viability is measured with the trypan blue exclusion assay, and <5% of cell death is observed with SRT1720 treatment.

• Modèles animaux

  Chase-SCID mice with MM.1S cells

• Dosages

  200 mg/kg

• Administration

  Orally