NSC 74859 (S3I-201)

Le NSC 74859 (S3I-201) inhibe la croissance et induit l'apoptose préférentiellement dans les cellules tumorales qui contiennent du Stat3 activé de manière persistante en inhibant la formation du complexe Stat3·Stat3 ainsi que les activités de liaison à l'ADN et de transcription de Stat3. De plus, il inhibe également l'expression des gènes régulés par Stat3 codant pour la cycline D1, Bcl-xL et la survivine. [1] Ce composé inhibe les lignées cellulaires de carcinome mammaire MDA-MB-435, MDA-MB-453 et MDA-MB-231 avec une IC50 de 100 µM. De plus, les cellules dont la signalisation TGF-β est altérée sont quatre fois plus sensibles au S3I-201. [2] Une étude récente montre qu'il potentialise l'effet antiprolifératif dans les cellules HepG2 et Huh-7 via la voie de signalisation STAT3. [3]

Le NSC 74859 (S3I-201) (5 mg/kg, i.v. tous les 2 ou tous les 3 jours) montre une efficacité antitumorale dans des modèles murins avec des xénogreffes de tumeurs mammaires humaines qui hébergent du Stat3 constitutivement actif. [1] Ce traitement composé réduit la réplication du virus varicelle-zona (VZV) sur la base du signal de bioluminescence et du nombre de xénogreffes cutanées positives par rapport aux souris traitées au DMSO en inhibant la phosphorylation de STAT3. [4]

• Test de liaison à l'ADN de Stat3 in vitro et analyse EMSA

  En bref, 100 μL de biotinyl-e-Ac-EPQpYEEIEL-OH (dans 50 mM Tris/150 mM NaCl, pH 7,5) sont ajoutés à chaque puits de plaques de microtitration à 96 puits revêtues de streptavidine et incubés sous agitation à 4 °C pendant une nuit. Ensuite, les plaques sont rincées avec du PBS/Tween 20, puis deux fois avec 200 μL de BSA-T-PBS (0,2 % BSA/0,1 % Tween 20/PBS). Ensuite, 50 μL de protéine de fusion Lck-SH2-GST (6,4 ng/mL dans le BSA-T-PBS) sont ajoutés à chaque puits de la plaque à 96 puits en présence et en absence de 50 μL de NSC 74859 (S3I-201) (pour des concentrations finales de 30 et 100 mM), et la plaque est agitée à température ambiante pendant 4 heures. Après avoir retiré les solutions, chaque puits est rincé quatre fois avec du BSA-T-PBS (200 μL), et 100 μL d'anticorps polyclonal de lapin anti-GST (100 ng/mL dans le BSA-T-PBS) sont ajoutés à chaque puits et incubés à 4 °C pendant une nuit. Après lavage avec du BSA-T-PBS, 100 μL d'anticorps de souris anti-lapin conjugué à la peroxydase de raifort (200 ng/mL dans le BSA-T-PBS) sont ajoutés à chaque puits et incubés pendant 45 minutes à température ambiante. Après quatre étapes de lavage avec du BSA-T-PBS et trois étapes de lavage avec du PBS-T, 100 μL de substrat de peroxydase sont ajoutés à chaque puits et incubés pendant 5-15 minutes. La réaction de peroxydase est arrêtée par l'ajout de 100 μL de solution d'acide sulfurique 1 M, et l'absorbance est lue à 450 nm avec un lecteur de plaques ELISA.

• Lignées cellulaires

  MDA-MB-435, MDA-MB-453 and MDA-MB-231 cells lines

• Concentrations

  ~ 250 μM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  The MTT assay is based on the conversion of the yellow tetrazolium salt MTT to purple formazan crystals by metabolically active cells. The MTT assay provides a quantitative determination of viable cells. Cells are seeded in 96-well microplates in complete culture medium in the absence or presence of increasing serial dosages of NSC 74859 (S3I-201) as indicated. At 72 hours after culture, the number of viable cells is measured by adding 100 μL/well of 2 mg/mL MTT solution. After 2 hours, the medium is removed. The absorbance is read at 590 nm with an enzyme-linked immunosorbent assay reader. Each treatment point is performed in 10 wells or sextuplicate.

• Modèles animaux

  Human breast cancer MDA-MB-231 cells are injected s.c. into the left flank of athymic nu/nu mice.

• Dosages

  ≤5 mg/kg

• Administration

  Administered via i.v.