Rivaroxaban

L'activité du Rivaroxaban contre les sérine protéases purifiées est mesurée à l'aide de substrats chromogéniques ou fluorogéniques dans des microplaques à 96 puits. Les enzymes sont incubées avec ce composé ou son solvant, le diméthylsulfoxyde (DMSO), pendant 10 minutes. Les réactions sont initiées par l'ajout du substrat, et la couleur ou la fluorescence est surveillée en continu à 405 nm à l'aide d'un lecteur Spectra Rainbow Thermo, ou à 630/465 nm à l'aide d'un SPECTRAfluor plus, respectivement, pendant 20 minutes. L'activité enzymatique est analysée dans les tampons suivants (concentrations finales) : FXa humain (0,5 nM), FXa de lapin (2 nM), FXa de rat (10 nM), ou urokinase (4 nM) dans un tampon Tris-HCl 50 mM pH 8.3, 150 mM NaCl, et 0,1% d'albumine sérique bovine (BSA) ; Pefachrome FXa (50-800 μM) ou chromozym U (250 μM) avec de la thrombine (0,69 nM), de la trypsine (2,2 nM), ou de la plasmine (3,2 nM) dans 0,1 μM Tris-HCl, pH 8.0, et 20 mM CaCl₂ ; chromozym TH (200 μM), chromozym plasmine (500 μM), ou chromozym trypsine (500 μM) avec FXIa (1 nM) ou APC (10 nM) dans un tampon phosphate 50 mM, pH 7.4, 150 mM NaCl ; et S 2366 (150 ou 500 μM) avec FVIIa (1 nM) et facteur tissulaire (3 nM) dans un tampon Tris-HCl 50 mM, pH 8.0, 100 mM NaCl, 5 mM CaCl₂ et 0,3% BSA, H-D-Phe-Pro-Arg-6-amino-1-naphtalène-benzylsulfonamide-H2O (100 μM) et mesurée pendant 3 heures. L'essai FIXaβ/FX, comprenant FIXaβ (8,8 nM) et FX (9,5 nM) dans un tampon Tris-HCl 50 mM, pH 7.4, 100 mM NaCl, 5 mM CaCl₂ et 0,1% BSA, est démarré par l'ajout de I-1100 (50 μM), et mesuré pendant 60 minutes. La constante d'inhibition (Ki) contre le FXa est calculée selon l'équation de Cheng-Prusoff. L'IC50 est la quantité d'inhibiteur requise pour diminuer de 50% la vitesse initiale du contrôle.

Caco-2, wild-type, and P-gp-overexpressing LLC-PK1

0 - 100 μM

2 hours

LLC-PK1 and L-MDR1 cells are seeded in 96-well culture plates with microporous polycarbonate inserts and grown for 4 days in the same medium as used for cell cultures but without vincristine. The medium is replaced every 2 days. Before running the assay, the culture medium is replaced by HBSS buffer supplemented with 10 mM HEPES. Rivaroxaban are dissolved in DMSO and diluted with transport buffer to the respective final test concentrations (final DMSO concentration is always 1%). For inhibitor studies, the inhibitor is added at the appropriate concentration. counted. After 2 hour incubation at 37 °C, samples are taken from both compartments and, after the addition of ammonium acetate buffer and acetonitrile, are analyzed by LC-MS/M

Fasted, male Wistar rats (HsdCpb:WU) and fasted, female New Zealand White rabbits (Esd:NZW).

≤0.3 mg/kg for i.v. and ≤3 mg/kg for p.o.

Administered via i.v. or p.o.