PD 98059

Le PD98059 inhibe soit la MEK1 basale, soit une MEK partiellement activée produite par mutation de la sérine aux résidus 218 et 222 en glutamate (MEK-2E) avec une IC50 de 2 μM. Ce composé n'inhibe pas les homologues de la MAPK, JNK et P38. Il est très sélectif contre la MEK, car il n'inhibe pas un certain nombre d'autres activités de kinases, notamment la Raf kinase, la kinase dépendante de l'AMPc, la protéine kinase C, v-Src, la kinase du récepteur du facteur de croissance épidermique (EGF), la kinase du récepteur de l'insuline, la kinase du récepteur du PDGF et la phosphatidylinositol 3-kinase. Cet inhibiteur inhibe l'activation de la MAPK stimulée par le PDGF et l'incorporation de thymidine dans les cellules 3T3 avec des IC50 d'environ 10 μM et environ 7 μM, respectivement. [1] Il empêche puissamment l'activation de la MEK1 par la Raf ou la MEK kinase avec une IC50 de 4 μM, et inhibe faiblement l'activation de la MEK2 par la Raf avec une IC50 de 50 μM. Ce produit chimique n'inhibe pas l'activation des homologues de la MEK MKK4 et de la RK kinase qui participent aux cascades de kinases stimulées par le stress et l'interleukine-1 dans les cellules KB et PC12, et l'activation de la p70 S6 kinase par l'insuline ou le facteur de croissance épidermique dans les cellules Swiss 3T3. [2] Il bloque complètement la différenciation des cellules PC12 induite par le facteur de croissance nerveuse (NGF) sans altérer la viabilité cellulaire. [3] Ce composé inhibe la prolifération des cellules RAW264.7 dans la culture contenant du RANKL de manière dose-dépendante, entraînant une diminution apparente des cellules TRAP-positives. [4]

Le traitement des souris 30 minutes avant l'ischémie cérébrale focale avec PD98059 protège contre les dommages, entraînant une diminution du volume de l'infarctus. [5] Un prétraitement avec ce composé 30 minutes avant et ensuite avec des injections horaires de céruléine pendant 3 heures améliore significativement la pancréatite aiguë induite par la céruléine sur la base du poids humide et de l'histologie du pancréas. [6] L'administration de ce produit chimique (10 mg/kg) à des souris 1 heure après la carragénine entraîne une réduction de tous les paramètres d'inflammation mesurés. [7]

• Activité inhibitrice de la MEK in vitro

  L'incorporation de ³²P dans la protéine basique de la myéline (MBP) est analysée en présence de protéines de fusion glutathion S-transférase (GST) contenant la MAPK de 44 kDa (GST-MAPK) ou la MEK de 45 kDa (GST-MEK1). Les analyses sont effectuées dans 50 μL de 50 mM Tris, pH 7,4/10 mM MgCl₂/2 mM EGTA/10 μM [γ-³²P]ATP contenant 10 μg de GST-MEK1, 0,5 μg de GST-MAPK et 40 μg de MBP. Après incubation à 30°C pendant 15 minutes, les réactions sont arrêtées par l'ajout de tampon d'échantillon Laemmli SDS. La MBP phosphorylée est résolue par SDS/10% PAGE.

• Lignées cellulaires

  K-Balb, KNRK, v-raf-3Y1, SRA/3Y1, EGFR/3T3, and K562

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~100 μM

• Temps dincubation

  3 dyas, or 7-10 days

• Méthode

  For monolayer growth, cells are plated into multi-well plates at 10,000-20,000/mL. Forty-eight hours later, various concentrations of PD98059 are added to the cell growth medium and incubation is continued for an additional 3 days. Cells are then removed from the wells by incubation with trypsin and enumerated with a Coulter Counter. For growth in soft agar, cells are seeded into 35-mm dishes at 5,000-10,000 cells per dish with growth medium containing 0.3% agar and desired concentrations of this compound. After 7-10 days of growth, visible colonies are manually enumerated with the aid of a dissecting microscope.

• Modèles animaux

  Male Sprague–Dawley rats with acute pancreatitis

• Dosages

  10 mg/kg

• Administration

  Injection i.v.