OSU-03012 (AR-12)

OSU-03012 (AR-12) induit la mort apoptotique dans les cellules PC-3 avec une IC50 de 5 µM et réduit l'activité de la p70^S6K immunoprécipitée. Il supprime complètement la croissance cellulaire dans une gamme diversifiée de lignées de cellules tumorales à des concentrations de 3–5 μm, par rapport à la concentration d'au moins 50 μm. [1] Ce composé favorise la mort cellulaire à un degré plus élevé dans les cellules de gliome que dans les astrocytes non transformés. Il provoque une induction dose-dépendante de la mort cellulaire qui n'est pas altérée par la mutation p53, l'expression de l'ERBB1 VIII ou la perte de fonction de la phosphatase et de la tensine due à une délétion homologue sur le chromosome 10. OSU-03012 et les rayonnements ionisants provoquent une élévation additive, indépendante des caspases, de la mort cellulaire. Sa létalité en tant qu'agent unique ou lorsqu'il est combiné avec des modulateurs de signalisation n'est pas modifiée dans les cellules dépourvues d'expression de BIM ou de BAX/BAK. Il favorise la libération de la cathepsine B du compartiment lysosomal et celle de l'AIF des mitochondries. La létalité de ce composé est atténuée dans les cellules protéine kinase R-like endoplasmic reticulum kinase-/- , ce qui est corrélé à la réduction du clivage de BID et à la suppression de la libération de cathepsine B et d'AIF dans le cytosol. [2] Il inhibe la prolifération et la migration des cellules cancéreuses thyroïdiennes (cellules NPA, WRO et ARO) et induit l'apoptose, ce qui entraîne une augmentation des cellules en phase S sans augmentation des cellules en G2. OSU-03012 est un inhibiteur ATP-compétitif de l'activité de PAK et supprime la phosphorylation d'AKT dans les cellules cancéreuses thyroïdiennes. [3] Il inhibe la croissance cellulaire des lignées de cellules de carcinome hépatocellulaire, y compris les cellules Huh7, Hep3B et HepG2 avec des valeurs d'IC50 inférieures à 1 μM. Ce composé ne supprime pas l'activité de PDK1 ou d'AKT ou n'induit pas l'apoptose cellulaire, mais induit l'autophagie dans les cellules Huh7. De plus, une accumulation d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) est détectée après son traitement. [4] Une étude récente montre qu'il pourrait améliorer la susceptibilité des lignées cellulaires mutantes (Bcr)-Abl à l'apoptose induite. [5]

OSU-03012 (AR-12) supprime la croissance tumorale de 57,59% et augmente la LC3 clivée dans les xénogreffes tumorales Huh7 à 200 mg/kg. [4] Ce composé diminue remarquablement l'expression de la protéine EGFR dans les tumeurs de 48% par rapport aux contrôles du véhicule et empêche également YB-1 de se lier au promoteur de l'EGFR dans les xénogreffes MDA-MB-435/LCC6. [6] Il est bien toléré et inhibe la croissance des xénogreffes de schwannome HMS-97 de 55% après administration orale. [7]

• Dosage de la PDK-1 Kinase

  Cet essai in vitro est réalisé en utilisant un kit de dosage de la PDK-1 kinase. Cet essai acellulaire est basé sur la capacité de la PDK-1 recombinante, en présence de véhicule DMSO ou d'OSU-03012 (AR-12), à activer sa kinase régulée par le sérum et les glucocorticoïdes en aval qui, à son tour, phosphoryle le substrat peptidique spécifique de l'Akt/kinase régulée par le sérum et les glucocorticoïdes RPRAATF avec [γ-³²P]ATP. Le substrat peptidique ³²P-phosphorylé est ensuite séparé de l'ATP [γ-³²P] résiduel en utilisant du papier phosphocellulose P81 et quantifié dans un compteur à scintillation après trois lavages avec de l'acide phosphorique à 0,75%.

• Lignées cellulaires

  PC-3 cells

• Concentrations

  0-10 μM

• Temps dincubation

  ~72 hours

• Méthode

  The effect of OSU-03012 (AR-12) on PC-3 cell viability is assessed by using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide assay in six replicates. Cells are grown in 10% FBS- supplemented RPMI 1640 in 96-well, flat-bottomed plates for 24 hours. They are exposed to various concentrations of this compound (0-10 μM) dissolved in DMSO (final concentration ≤0.1%) in 1% serum-containing RPMI 1640 for different time intervals (~72 hours). Controls receive DMSO vehicle at a concentration equal to that in OSU-03012-treated cells. The medium is removed and replaced by 200 μL of 0.5 mg/mL 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide in 10% FBS-containing RPMI 1640. The cells are incubated in the CO₂ incubator at 37 °C for 2 hours. Supernatants are removed from the wells, and the reduced 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide dye is solubilized in 200 μL DMSO per well. Absorbance at 570 nm is determined by using a plate reader.

• Modèles animaux

  Huh7 tumor xenografts in male BALB/c nude mice

• Dosages

  100-200 mg/kg

• Administration

  Daily by gavage