Nutlin-3

Nutlin-3 inhibe puissamment l'interaction MDM2-p53, conduisant à l'activation de la voie p53. Ce traitement composé induit l'expression de MDM2 et p21, et présente une activité antiproliférative puissante avec une IC50 d'environ 1.5 μM, uniquement dans les cellules avec p53 de type sauvage telles que HCT116, RKO et SJSA-1, mais pas dans les lignées cellulaires p53 mutantes SW480 et MDA-MB-435. Dans les cellules SJSA-1, ce traitement composé à 10 μM pendant 48 heures induit significativement l'Apoptosis cellulaire dépendante de la caspase d'environ 45%. Bien qu'il inhibe également la croissance et la viabilité de la peau humaine (1043SK) et de l'embryon de souris (NIH/3T3) avec une IC50 de 2.2 μM et 1.3 μM respectivement, les cellules restent viables 1 semaine après le traitement même à 10 μM de ce produit chimique, contrairement aux cellules SJSA-1 dont la viabilité est perdue à 3 μM de ce traitement chimique. [1] Il n'induit pas la phosphorylation de p53 sur des résidus sérine clés et ne révèle aucune différence dans leur liaison à l'ADN séquence-spécifique et leur capacité à transactiver les gènes cibles de p53 par rapport à la p53 phosphorylée induite par les médicaments génotoxiques doxorubicine, démontrant que la phosphorylation de p53 sur des sérines clés est dispensable pour l'activation transcriptionnelle et l'Apoptosis. [2] Bien qu'il se lie moins efficacement à MDMX qu'à MDM2, ce composé peut bloquer l'interaction MDMX–p53 et induire la voie p53 dans les cellules de rétinoblastome (Weri1) avec une IC50 de 0.7 μM. [3] Ce produit chimique à 30 μM perturbe également l'interaction endogène p73-HDM2 et améliore la stabilité et les activités pro-Apoptosis de p73, conduisant à l'inhibition de la croissance cellulaire dépendante de la dose et à l'induction de l'Apoptosis dans les cellules sans p53 de type sauvage. [4]

L'administration orale de Nutlin-3 à 200 mg/kg deux fois par jour pendant 3 semaines inhibe significativement la croissance tumorale des xénogreffes SJAS-1 de 90%, comparable à l'effet du traitement par doxorubicine avec 81% d'inhibition de la croissance tumorale. [1]

• Étude Biacore

  L'essai de compétition est réalisé sur un Biacore S51. Une puce de capteur de série S CM5 est utilisée pour l'immobilisation d'un anticorps PentaHis pour la capture de la p53 à étiquette His. Le niveau de capture est d'environ 200 unités de réponse (1 unité de réponse correspond à 1 pg de protéine par mm²). La concentration de protéine MDM2 est maintenue constante à 300 nM. Nutlin-3 est dissoute dans du DMSO à 10 mM et diluée davantage pour obtenir une série de concentrations de ce composé dans chaque échantillon de test MDM2. L'essai est effectué à 25 °C dans un tampon de fonctionnement (10 mM Hepes, 0.15 M NaCl, 2% DMSO). La liaison MDM2-p53 en présence de ce produit chimique est calculée en pourcentage de la liaison en son absence et l'IC50 est calculée

• Lignées cellulaires

  HCT116, RKO, SJSA-1, SW480, and MDA-MB-435

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 30 μM

• Temps dincubation

  8, 24, and 48 hours

• Méthode

  Cells are exposed to various concentrations of Nutlin-3 for 8, 24 and 48 hours. The transcriptional levels of p21 and MDM2 genes are analyzed by real-time PCR, and protein levels by western blotting. Cell viability is measured by the MTT assay. Cell apoptosis is determined by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling (TUNEL) staining with flow cytometry and fluorescence microscopy.

• Modèles animaux

  Athymic female nude mice (Nu/Nu-nuBR) injected subcutaneously with SJSA-1 cells

• Dosages

  200 mg/kg

• Administration

  Orally, twice a day