Motesanib Diphosphate (AMG-706)

Motesanib Diphosphate (AMG-706) a une large activité contre la famille des VEGFR humains, et affiche une sélectivité >1000 contre EGFR, Src et la kinase p38. Il inhibe significativement la prolifération cellulaire des HUVEC induite par le VEGF avec une IC50 de 10 nM, tout en affichant peu d'effet sur la prolifération induite par le bFGF avec une IC50 de >3 000 nM. Ce composé inhibe également puissamment la prolifération induite par le PDGF et la phosphorylation de c-kit induite par le SCF avec une IC50 de 207 nM et 37 nM, respectivement, mais n'est pas efficace contre la phosphorylation de l'EGFR induite par l'EGF et la viabilité cellulaire des cellules A431. [1] Bien qu'il affiche peu d'activité antiproliférative sur la croissance cellulaire des HUVEC seules, il sensibilise significativement les cellules à la radiation fractionnée. [2]

L'administration de Motesanib Diphosphate (AMG-706) à 100 mg/kg inhibe significativement la perméabilité vasculaire induite par le VEGF de manière temps-dépendante. L'administration orale de ce composé deux fois par jour ou une fois par jour inhibe puissamment, de manière dose-dépendante, l'angiogenèse induite par le VEGF en utilisant le modèle de cornée de rat avec une ED50 de 2.1 mg/kg et 4.9 mg/kg, respectivement. Il induit une régression tumorale dose-dépendante des xénogreffes A431 établies en ciblant sélectivement la néovascularisation dans les cellules tumorales. [1] Lorsqu'il est administré en combinaison avec la radiothérapie, il présente une activité anti-tumorale significative dans les modèles de xénogreffes de carcinome épidermoïde de la tête et du cou (HNSCC). [2] Le traitement avec ce composé induit également des réductions significatives dose-dépendantes de la croissance tumorale et de la densité des vaisseaux sanguins des xénogreffes MCF-7, MDA-MB-231 ou Cal-51. [3]

• Tests de kinase in vitro

  Les concentrations optimales d'enzyme, d'ATP et de substrat (peptide de gastrine) sont établies pour chaque enzyme à l'aide de tests de fluorescence résolue dans le temps homogène (HTRF). Pour le Motesanib Diphosphate (AMG-706), une courbe de réponse à 10 points est testée pour chaque enzyme en utilisant une concentration d'ATP de deux tiers de K_m pour chacune. La plupart des tests consistent en une enzyme mélangée à un tampon de réaction de kinase [20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 100 mM NaCl, 1.5 mM EGTA]. Une concentration finale de 1 mM DTT, 0.2 mM NaVO₄ et 20 μg/mL de BSA est ajoutée avant chaque test. Pour tous les tests, 5.75 mg/mL de streptavidine-allophycocyanine et 0.1125 nM d'Eu-PT66 sont ajoutés immédiatement avant la réaction HTRF. Les plaques sont incubées pendant 30 minutes à température ambiante et lues sur un instrument Discovery. Les valeurs IC50 sont calculées à l'aide de l'algorithme de Levenberg-Marquardt dans une équation logistique à quatre paramètres.

• Lignées cellulaires

  A431, MO7e, HUVEC and NHDF cells

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~25 μM

• Temps dincubation

  2 hours

• Méthode

  Cells are preincubated for 2 hours with different concentrations of Motesanib Diphosphate (AMG-706), and exposed with 50 ng/mL VEGF or 20 ng/mL bFGF for an additional 72 hours. After washing twice with DPBS, plates are frozen at -70 °C for 24 hours. Proliferation is assessed by the addition of CyQuant dye, and plates are read on a Victor 1420 workstation. IC50 data are calculated using the Levenberg-Marquardt algorithm into a four-parameter logistic equation.

• Modèles animaux

  Female Sprague-Dawley rats with induced corneal angiogenesis, and female CD-1 nu/nu mice injected s.c. with A431 cells

• Dosages

  ~100 mg/kg

• Administration

  Orally administered twice daily or once daily