GSK461364

GSK461364 inhibe la prolifération des lignées cellulaires cancéreuses d'origines multiples avec une toxicité minimale dans les cellules humaines non divisées. [1] Le silençage de l'ARN de p53 WT augmente l'activité antiproliférative de ce composé. Comme de nombreuses thérapies anticancéreuses ont tendance à être plus efficaces chez les patients p53 WT, la sensibilité plus élevée des tumeurs déficientes en p53 à cette substance chimique pourrait potentiellement offrir une opportunité de traiter les tumeurs réfractaires à d'autres chimiothérapies ainsi qu'une thérapie de première ligne pour ces génotypes. Ce composé est un thiophène amide qui inhibe l'enzyme Plk1 purifiée in vitro avec un K_i de 2 nM et présente une sélectivité >100 fois supérieure pour Plk1 par rapport à Plk2 et Plk3. C'est un puissant inhibiteur de la prolifération cellulaire, provoquant une inhibition de 50 % de la croissance (GI50) inférieure à 100 nM dans la plupart des lignées cellulaires testées avec une toxicité limitée contre les cellules humaines non proliférantes. L'inhibition de la progression du Cell Cycle est dépendante de la concentration avec un retard initial en phase G2 à des concentrations élevées de cet agent et un arrêt en phase M à des concentrations plus faibles. Actuellement, il est en phase d'essai d'escalade de dose pour la première fois chez l'homme. Les lignées cellulaires présentant des mutations dans le gène TP53 avaient tendance à être plus sensibles à ce composé, et l'inhibition de la réponse p53 par silençage de l'ARN confère une sensibilité accrue dans certaines cellules p53 de type sauvage (WT). De plus, ces lignées cellulaires plus sensibles présentent également des niveaux accrus d'instabilité chromosomique, une caractéristique associée aux mutations de TP53. [2] Lors des tests précliniques, cette substance chimique montre une activité antiproliférative contre plusieurs (>120) lignées cellulaires tumorales et inhibe puissamment la prolifération de plus de 83 % et 91 % de ces lignées cellulaires, avec des valeurs d'IC50 inférieures à 50 et 100 nM, respectivement. [3]

L'inhibition de la croissance des cultures cellulaires par GSK461364 peut être cytostatique ou cytotoxique, mais elle entraîne une régression tumorale dans les modèles de xénogreffes tumorales sous un calendrier de dosage approprié. Ce composé montre une activité antitumorale claire dans les modèles de xénogreffes tumorales humaines. [1] Il montre un arrêt mitotique dose-dépendant dans les xénogreffes de souris, ce qui est corrélé avec les effets sur la croissance tumorale. [2] L'administration intrapéritonéale de cette substance chimique provoque une régression ou un retard de croissance tumorale dans différents modèles de xénogreffes, y compris les xénogreffes Colo205. La suppression de Plk1 in vivo en utilisant cet agent entraîne un arrêt mitotique avec des figures mitotiques aberrantes constituées de fuseaux mitotiques monopolaires ou effondrés. [3]

• Tests enzymatiques

  Les réactions de kinase sont effectuées dans un volume d'essai final de 10 μL en utilisant le kit d'essai Z-Lyte (peptide Ser/Thr 16). En bref, les réactions contiennent 50 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, 0,01 % Brij 35, 0,01 mg/mL de caséine, 200 μM d'ATP, 200 μM de peptide Polo Box (NH₂-MAGPMQS[pT]PLNGAKK-OH) et 6 nM de Plk1 recombinant (H6-tev-PLK 1-603). Plk1 est préincubé pendant 60 minutes avec 0 à 1 μM de GSK461364. Les réactions sont ensuite initiées par l'ajout de 2 μM de peptide. Après 15 minutes à 23 °C, les réactions sont arrêtées et traitées selon le protocole Z′-Lyte et lues sur un lecteur de plaques EnVision. Les valeurs de fluorescence brutes sont converties en concentration de produit formé à l'aide de normes de substrat et de produit. Étant donné que la puissance d'inhibition de ce composé varie en fonction de la concentration d'ATP d'une manière compatible avec un mode d'inhibition compétitif de l'ATP, une limite supérieure pour le K_i de cette substance chimique est déterminée.

• Lignées cellulaires

  Prostate(LNCap,PC3), Cervix(HeLa), Pancreas(ASPC1), Sarcoma(Saos-2)Ovary(OVCAR8), Stomach(NCI-N87), Melanoma(SKMEL3,A431, MALME3M), Colon(Colo205,SW620,HCT116), Breast(SKBR3,MDA-MB-453,MCF7), Lung(NCI-H82,MV522,NCI-H522), etc.

• Concentrations

  10 nM

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  Cancer cell lines are seeded into 384-well microtiter plates. After seeding, the cells are incubated at 37 °C in 5% CO₂ for 24 hours. GSK461364 is added to each cell line at 10 nM with a nontreated control. A zero-time (T = 0) value is read for each cell line. After 72 hours, the medium containing this compound or DMSO control is aspirated from all of the remaining cells and the cell nuclei are stained with 4′,6-diamidino-2-phenylindole and the fluorescent intensity measured using an InCell1000 High Content Analyzer. The percent intensity of the 4′,6-diamidino-2-phenylindole stain at 72 hours, relative to intensity at time zero, is calculated for each concentration of this chemical in each of the triplicate wells.

• Modèles animaux

  Nude mice bearing Colo205 (colorectal) xenograft tumors

• Dosages

  25, 50, and 100 mg/kg

• Administration

  Administered via i.p.(every 2 days or every 4 days)