Chelerythrine Chloride (NSC 646662)

Chelerythrine Chloride (NSC 646662) interagit avec le domaine catalytique de la PKC, est un inhibiteur compétitif vis-à-vis de l'accepteur de phosphate (histone IIIS) avec une valeur Ki de 0,7 μM et un inhibiteur non compétitif vis-à-vis de l'ATP. Il montre des effets cytotoxiques puissants contre les cellules L-1210 avec une IC50 de 0,53 μM. Ce composé n'altère aucune activité de la PKA, de la TPK et de la Ca/CM-PK, et son effet inhibiteur sur l'activité de la PKC ne varie pas parmi les différents substrats, y compris le GS, le MLC, la MBP et le fibrinogène. [1] Il inhibe l'activité de la PKC dans des extraits cellulaires bruts de cellules SQ-20B de manière dose-dépendante. La chélérythrine diminue la viabilité cellulaire, déterminée par le test MTT, de manière dose-dépendante dans les cellules SCC35, JSQ3, SQ20B et SCC61. [2] À 5 μM, elle supprime l'expression induite par le VEGF d'ICAM-1, VCAM-1 et E-sélectine dans les HUVEC. Elle supprime également l'activité NF-κB induite par le VEGF dans les HUVEC à la même concentration et supprime toute l'adhésivité leucocytaire basale et induite par le VEGF dans les HUVEC. [3] À des concentrations de 6 mM à 30 mM, elle induit rapidement la pycnose, le rétrécissement et la mort cellulaire ultérieure dans les myocytes cardiaques. La mort des myocytes induite par la chélérythrine (30 μM) est accompagnée d'une fragmentation nucléaire et de l'activation des caspases-3 et -9 dans une culture primaire de myocytes ventriculaires de rat nouveau-né. À 10 μM, elle provoque la libération du cytochrome c des mitochondries, suggérant que les ROS médient la libération du cytochrome c induite par la chélérythrine dans les myocytes cardiaques. [4] Il déplace le peptide du domaine BH3 marqué par fluorescence d'une protéine de fusion recombinante GST-BcLXL avec une IC50 de 1,5 μM. À 2,5 μM et 5 μM pendant 16 heures, il induit une diminution substantielle du potentiel mitochondrial, comme indiqué par une augmentation de la fluorescence verte de JC-1 dans les cellules de neuroblastome humain SH-SY5Y. À 5 μM, il induit également l'apparition d'ADN sub-G1, ce qui est indicatif de l'apoptose dans les cellules SH-SY5Y. À 10 μM, il induit un changement de potentiel mitochondrial, la libération de CytC des mitochondries dans les cellules SH-SY5Y. [5]

Chelerythrine Chloride (NSC 646662) (5 mg/kg i.p.) entraîne un retard de croissance tumorale chez les souris porteuses de xénogreffes SQ-20B. [2] Ce composé (5 mg/kg) augmente significativement les noyaux TUNEL-positifs dans le myocarde ainsi que les formes clivées de caspase-3 et -9 chez le rat adulte. [4]

• essai pour la protéine kinase C

  La protéine kinase C purifiée est préparée à partir de cerveau de rat. En bref, le mélange d'incubation (200 μL) contient 20 mM de tampon Tris/HCl (pH 7,5), 10 mM de MgCl₂, 200 μg/mL d'histones, des micelles préparées avec 700 μM de phosphatidylsérine et 180 μM de 1,2-dioléeine dans 0,3% de triton X100, 0,2 mM de CaCl₂, 100 μM d'ATP, [γ-³²P ]-ATP (10⁵ dpm), Chelerythrine Chloride (NSC 646662) à tester (solubilisé dans du diméthylsulfoxyde) et l'enzyme (0,5 μg de protéine). Après incubation à 30℃ pendant 3 minutes, la réaction est terminée par l'ajout de 3 mL d'acide trichloroacétique à 20%. Les matériaux précipitables par l'acide sont recueillis sur des filtres Whatman GFE et lavés abondamment avec de l'acide trichloroacétique à 20% glacé. La radioactivité sur les filtres est mesurée à l'aide d'un compteur à scintillation liquide. L'activité de la protéine kinase C est corrigée de l'activité non spécifique en effectuant un dosage en l'absence de micelles et de CaCl₂.

• Lignées cellulaires

  L-1210 cells

• Concentrations

  ~10 μM

• Temps dincubation

  2 days

• Méthode

  The lymphocytic mouse leukemia L1210 cells are plated sparsely at 1×10⁴ cells per well in 24-well cluster plates in RPMI 1640 medium containing 10% foetal calf serum, 4 mM glutamine, 100 U/mL penicillin, 100 pg/mL streptomycin sulphate and Chelerythrine Chloride (NSC 646662) to be tested (solubilized in dimethylsulphoxyde ). After a 2 day incubation period at 37 ℃ in a humidified atmosphere (5% CO₂ in air), growth is monitored by counting cell numbers in a coulter-counter. IC50 values are calculated on the basis of the linear regression lines established for this compound.

• Modèles animaux

  mice bearing SQ-20B xenografts

• Dosages

  5 mg/kg

• Administration

  Intraperitoneal injection