Lexibulin (CYT997)

N° de catalogueS2195 Lot:S219501

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Données techniques

Formule

C24H30N6O2
Poids moléculaire 434.53 N° CAS 917111-44-5
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 86 mg/mL (197.91 mM)
Ethanol 20 mg/mL (46.02 mM)
Water Insoluble
In Vivo (Ajoutez les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Lexibulin (CYT997, SRI-32007) est un puissant inhibiteur de la polymérisation des microtubules avec une IC50 de 10-100 nM dans les lignées cellulaires cancéreuses. Ce composé est en phase 2.
Cibles
Microtubules (cancer cell lines)
10 nM-100 nM
In vitro Le traitement par Lexibulin (CYT997) (1 μM) pendant 24 heures dans les cellules A549 induit une réorganisation rapide des microtubules, y compris la destruction du réseau microtubulaire existant et l'accumulation de tubuline en plaques dans le cytoplasme de certaines cellules, entraînant des altérations significatives de la morphologie cellulaire, y compris la perte d'adhérence et l'arrondissement des cellules. Il présente une puissante activité cytotoxique contre une gamme de 16 cellules cancéreuses avec des IC50 allant de 9 nM pour HepG2 à 101 nM pour KHOS/NP. En particulier, ce composé présente une activité puissante contre les cellules HCT15, connues pour posséder le mécanisme de résistance multidrogue Pgp (MDR+), avec une IC50 de 52 nM. Par l'inhibition de la polymérisation des microtubules, il bloque le cycle cellulaire à la limite G2-M et induit une augmentation du Bcl-2 phosphorylé et une expression accrue de la cycline B1, ainsi que l'activation de la caspase-3 et la génération de la poly (ADP-ribose) polymérase. Son traitement provoque une augmentation rapide et réversible de la perméabilité des monocouches de HUVEC avec une IC50 d'environ 80 nM après 1 heure d'exposition. Conformément à la perturbation de la tubuline cellulaire, il inhibe puissamment la prolifération, induit un arrêt du cycle cellulaire et, surtout, l'apoptose des lignées cellulaires de myélome humain (HMCL) et des cellules MM primaires.
In Vivo La demi-vie de Lexibulin (CYT997) pour l'administration orale (2,5 heures) aux rats est légèrement plus longue que celle pour l'administration intraveineuse (1,5 heure), avec une biodisponibilité orale absolue de 50% à 70%. L'administration orale de ce composé induit une inhibition dose-dépendante de la croissance tumorale des xénogreffes PC3 chez la souris, plus puissamment que le paclitaxel. Il est également efficace dans un modèle syngénique orthotopique utilisant les cellules de cancer du sein de souris 4T1, qui sont quelque peu réfractaires au traitement par paclitaxel. Une dose unique de CYT997 (7,5 mg/kg, i.p.) réduit significativement le flux sanguin tumoral après 6 heures dans les métastases hépatiques, à un degré similaire à celui du contrôle positif CA4P dosé à 100 mg/kg. Le traitement par ce composé (15 mg/kg/jour) prolonge significativement la survie dans un modèle murin de myélomatose systémique agressive.

Protocole (de référence)

Test kinase :[1]
  • Dosage turbidimétrique pour la polymérisation de la tubuline

    L'effet de Lexibulin (CYT997) sur la polymérisation des microtubules est déterminé à l'aide d'un dosage turbidimétrique conventionnel avec de la tubuline neuronale bovine, dans lequel l'assemblage des microtubules est surveillé par une augmentation de l'absorbance à 340 nm. Des concentrations croissantes de ce composé sont ajoutées à 100 μL de tubuline/GTP/glycérol. Les dosages turbidimétriques de l'assemblage des microtubules sont effectués en incubant la protéine microtubulaire bovine dans des cuvettes à 37 °C dans un spectrophotomètre thermostatiquement contrôlé, en mesurant le changement d'absorbance à 340 nm au fil du temps dans un tampon PEM [80 nM PIPES (pH 6.9), 2 mM MgCl2, 0.5 mM EGTA et 5% de glycérol].
Test cellulaire :[1]
  • Lignées cellulaires

    DU145, A549, Ramos, KHOS/NP, A375, HCT-15, HT1376, BT-20, A431, PA-1, U937, HepG2, TF-1, Baf3/TelJAK2, PC3, and K562

  • Concentrations

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

  • Temps dincubation

    ~72 hours

  • Méthode

    Cells are exposed to various concentrations of Lexibulin (CYT997) for ~72 hours. Cell proliferation is assessed with either the Alamar blue or MTT assays. For MTT assays, 5 mg/mL of MTT is added to all wells, plates are incubated for 6 hours at 37 °C, and then lysis buffer is added (10% SDS in 0.01 N HCl) and absorbance is measured at 620 nm in a BMG Technologies Lumistar or Polarstar plate reader. For Alamar blue assays, Alamar blue (10 μL/well) is added to each well and the plates are incubated at 37 °C for 4 hours. The fluorescence is then measured using a fluorescence plate reader with an excitation filter at 544 nm and an emission filter at 590 nm. For cell cycle analysis, cells are fixed and permeabilized with 70% ethanol in PBS and incubated at 4 °C overnight. RNase-treated samples (10 μg RNase/mL for 20 minutes at 37 °C) are stained with propidium iodide (5 μg/mL) at 4 °C for a minimum of 10 minutes. Cell cycle variables are determined by fluorescence-activated cell sorting (FACS) analysis using a Beckman-Coulter Quanta SC MPL system and analyzed using CXP Software. For apoptosis analysis, cells are detached and collected. Annexin staining is done using the Vybrant Apoptosis Assay Kit. Cells are stored on ice and analyzed on a Beckman Coulter Quanta MPL within 1 hour of preparation. Annexin V–positive cells are determined using two-channel analysis.
Étude animale :[1]
  • Modèles animaux

    Male nude mice inoculated s.c. with PC3 cells, and female BALB/c mice inoculated with 4T1 cells

  • Dosages

    ~30 mg/kg/day

  • Administration

    Oral gavage thrice a day

Références

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19887548/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19907921/

Validation du produit par le client

<p>CYT997 inhibits cellular proliferation in acute myeloid leukemia (AML) cell lines. Cell viability was measured by a 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay in 96-well plates in the presence of increasing concentrations of CYT997 for 24 h.The results represent the mean ?SD of four replicates.</p>

Données de [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>CYT997 induces apoptosis in acute myeloid leukemia (AML) cell lines. HL-60 cells were treated with CYT997 (0, 50, 100, and 200 nM) for 24 h, resuspended in propidium iodide (PI)-containing hypotonic buffer, and then the percentage of apoptotic cells was analyzed by flow cytometry.</p>

Données de [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>Activation of caspases by CYT997. (A) Immunoblotting analysis for caspase-9, -8 and -3 and poly ADP-ribose polymerase (PARP), was performed in lysates of HL-60 cells treated with CYT997 (0, 50, 100 or 200 nM) for 24 h. (B) Annexin V-propidium iodide (PI) staining was performed to quantify phospha- tidylserine externalization in HL-60 cells treated with CYT997 (200 nM) or untreated for 24 h, in the presence or absence of the caspase-8 inhibitor. * P<0.05.</p>

Données de [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>Effects of CYT997 on the cell cycle. HL-60 cells were treated with CT997 (0, 50, 100 or 200 nM) for 24 h. The cell cycle was analyzed using propidium iodide (PI) staining followed by flow cytometry analysis.</p>

Données de [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

De Selleck Lexibulin (CYT997) A été cité par 8 Publications

A modular master regulator landscape controls cancer transcriptional identity [ Cell, 2021, 184(2):334-351.e20] PubMed: 33434495
HBV Core Promoter Inhibition by Tubulin Polymerization Inhibitor (SRI-32007) [ Adv Virol, 2020, 2020:8844061] PubMed: 33110426
CYT997(Lexibulin) induces apoptosis and autophagy through the activation of mutually reinforced ER stress and ROS in osteosarcoma [ J Exp Clin Cancer Res, 2019, 38(1):44] PubMed: 30704503
Intracellular reduction in ATP levels contributes to CYT997-induced suppression of metastasis of head and neck squamous carcinoma. [ J Cell Mol Med, 2019, 23(2):1174-1182] PubMed: 30450674
Survival of midbrain dopamine neurons depends on the Bcl2 factor Mcl1 [ Cell Death Discov, 2018, 4:107] PubMed: 30479840
Augmentation of the anticancer activity of CYT997 in human prostate cancer by inhibiting Src activity. [ J Hematol Oncol, 2017, 10(1):118] PubMed: 28606127
Structures of a diverse set of colchicine binding site inhibitors in complex with tubulin provide a rationale for drug discovery. [ FEBS J, 2016, 283(1):102-11] PubMed: 26462166
The microtubule depolymerizing agent CYT997 effectively kills acute myeloid leukemia cells via activation of caspases and inhibition of PI3K/Akt/mTOR pathway proteins. [XIAOHUI CHEN, et al. Exp Ther Med, 2013, 6(2):299-304] PubMed: 24137178

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