CP-466722

N° de catalogueS2245 Lot:S224501

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Données techniques

Formule

C₁₇H₁₅N₇O₂

Poids moléculaire

349.35

N° CAS

1080622-86-1

Solubilité (25°C)*

In vitro

4-Methylpyridine (chauffé au bain-marie à 50 °C)

5 mg/mL (14.31 mM)

DMSO

0.28 mg/mL (0.8 mM)

Water

Insoluble

In Vivo (Ajoutez les solvants au produit individuellement et dans lordre.)

Clear solution

5%4-Methylpyridine 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O

Validé par les laboratoires Selleck. Si vous avez besoin dajustements à cette formulation, contactez notre équipe commerciale pour des tests personnalisés.

0.1mg/ml (0.29mM)

Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 2 mg/ml clarified 4-Methylpyridine stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description

Le CP-466722 est un inhibiteur puissant et réversible de l'ATM, il n'affecte pas l'ATR et inhibe les membres de la famille PI3K ou PIKK dans les cellules.

Cibles

ATM

410 nM

In vitro

In vitro, le CP-466722 est identifié comme un inhibiteur potentiel pour diminuer l'activité de la kinase ATM purifiée à phosphoryler le substrat GST-p53(1–101). De plus, ce composé montre également des activités inhibitrices contre les kinases abl et src. Dans les cellules HeLa, ce composé, à des doses de 6 μM, entraîne l'inhibition de la phosphorylation dépendante de l'ATM en inhibant réversiblement l'activité de la kinase ATM induite par les radiations ionisantes (IR). En outre, l'induction de p53 dépendante de l'ATM est également inhibée par ce produit chimique dans les cellules cancéreuses mammaires humaines MCF-7 et les fibroblastes humains diploïdes primaires et immortalisés. En réponse aux IR, ce composé a augmenté la proportion de cellules avec un contenu en ADN G2/M et a réduit la proportion de cellules avec un contenu en ADN en phase G1 dans les cellules HeLa. Une exposition transitoire à ce produit chimique pendant une période de 4 heures sensibilise les cellules HeLa aux IR sans affecter le placage cellulaire ni la viabilité cellulaire.

Protocole (de référence)

Test kinase :^{^[1]}	Tests kinases in vitro Pour cribler les inhibiteurs de petites molécules de l'activité de la kinase ATM, un test kinase in vitro est adapté et un test ELISA est développé qui mesure l'état de phosphorylation de la cible en aval de l'ATM, p53. La GST-p53(1-101) recombinante et les ATM et ATR pleine longueur marquées par Flag sont purifiées pour être utilisées dans les tests ELISA et les tests kinases in vitro. En bref, les plaques Nunc 96 puits Maxisorp sont revêtues pendant la nuit (4 °C) avec 2 μg de GST-p53(1-101) recombinante purifiée dans du PBS. Toutes les incubations ultérieures sont effectuées à température ambiante. Les plaques sont lavées (0,05 % v/v-Tween/PBS) avant l'ajout de la kinase ATM recombinante pleine longueur purifiée (30 ng à 60 ng) dans un volume final de 80 μL de tampon de réaction (20 mM HEPES, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 10 mM MnCl₂, 1 mM DTT et 1 μM ATP) en présence ou en absence de CP-466722. Ce composé (10 μM) est ajouté aux plaques en double et le test kinase est incubé (90 minutes). Les plaques sont lavées (0,05 % v/v-Tween/PBS), bloquées (1 heure, 1 % w/v-BSA/PBS) et rincées avant que l'anticorps anti-Phospho(Ser15)-p53 (1:1000/PBS) ne soit ajouté aux plaques et incubé (1 heure). Pour réduire la liaison non spécifique, les plaques sont lavées (0,05 % v/v-Tween/PBS) avant incubation (1 heure) avec l'anticorps secondaire anti-IgG de chèvre conjugué à la HRP (1:5000/PBS). L'anticorps secondaire lié à la protéine GST-p53(1–101) phosphorylée est détecté avec le réactif de substrat TMB. Les plaques sont développées (15 minutes à 30 minutes) et la réaction est arrêtée (concentration finale de 1 M H₂SO₄) avant que l'absorbance ne soit déterminée (λ450nm). Ce composé qui inhibe l'activité de la kinase ATM dans les tests ELISA est caractérisé en ce qui concerne l'inhibition des kinases ATM/ATR en utilisant des tests kinases in vitro. Le Western blot utilisant l'anticorps anti-Phospho(Ser15)-p53 est utilisé comme lecture de l'inhibition d'ATM/ATR. Une analyse étendue de ce produit chimique (10 μM) contre un panel de kinases disponibles dans le commerce est réalisée par Upstate.
Test cellulaire :^{^[1]}	Lignées cellulaires HeLa and A-T Concentrations 0-6 μM Temps dincubation 4 hours Méthode HeLa or A-T (GM02052 expressing hTERT) cells are plated in triplicate and incubated for 24 hours. Cells are pre-treated: DMSO, CP466722 or KU55933 prior to IR (0-10Gy). Cells are incubated for 4 hours following IR before media is removed, cells washed (PBS), trypsined, counted and re-plated (2000 cells/plate, 10 cm plates) in the absence of this compound and incubated for 10 days. Prior to colony counting, cells are washed (PBS), stained (PBS, 0.0037%v/v-formaldehyde, 0.1%w/v-crystal violet), rinsed (dH₂O) and dried. Defined populations (>50 cells) are counted as one surviving colony, data are calculated as percentage surviving colonies relative to control plates +/− SE.

Test kinase :^{^[1]}

Tests kinases in vitro
Pour cribler les inhibiteurs de petites molécules de l'activité de la kinase ATM, un test kinase in vitro est adapté et un test ELISA est développé qui mesure l'état de phosphorylation de la cible en aval de l'ATM, p53. La GST-p53(1-101) recombinante et les ATM et ATR pleine longueur marquées par Flag sont purifiées pour être utilisées dans les tests ELISA et les tests kinases in vitro. En bref, les plaques Nunc 96 puits Maxisorp sont revêtues pendant la nuit (4 °C) avec 2 μg de GST-p53(1-101) recombinante purifiée dans du PBS. Toutes les incubations ultérieures sont effectuées à température ambiante. Les plaques sont lavées (0,05 % v/v-Tween/PBS) avant l'ajout de la kinase ATM recombinante pleine longueur purifiée (30 ng à 60 ng) dans un volume final de 80 μL de tampon de réaction (20 mM HEPES, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 10 mM MnCl₂, 1 mM DTT et 1 μM ATP) en présence ou en absence de CP-466722. Ce composé (10 μM) est ajouté aux plaques en double et le test kinase est incubé (90 minutes). Les plaques sont lavées (0,05 % v/v-Tween/PBS), bloquées (1 heure, 1 % w/v-BSA/PBS) et rincées avant que l'anticorps anti-Phospho(Ser15)-p53 (1:1000/PBS) ne soit ajouté aux plaques et incubé (1 heure). Pour réduire la liaison non spécifique, les plaques sont lavées (0,05 % v/v-Tween/PBS) avant incubation (1 heure) avec l'anticorps secondaire anti-IgG de chèvre conjugué à la HRP (1:5000/PBS). L'anticorps secondaire lié à la protéine GST-p53(1–101) phosphorylée est détecté avec le réactif de substrat TMB. Les plaques sont développées (15 minutes à 30 minutes) et la réaction est arrêtée (concentration finale de 1 M H₂SO₄) avant que l'absorbance ne soit déterminée (λ450nm). Ce composé qui inhibe l'activité de la kinase ATM dans les tests ELISA est caractérisé en ce qui concerne l'inhibition des kinases ATM/ATR en utilisant des tests kinases in vitro. Le Western blot utilisant l'anticorps anti-Phospho(Ser15)-p53 est utilisé comme lecture de l'inhibition d'ATM/ATR. Une analyse étendue de ce produit chimique (10 μM) contre un panel de kinases disponibles dans le commerce est réalisée par Upstate.

Test cellulaire :^{^[1]}

Lignées cellulaires
HeLa and A-T
Concentrations
0-6 μM
Temps dincubation
4 hours
Méthode
HeLa or A-T (GM02052 expressing hTERT) cells are plated in triplicate and incubated for 24 hours. Cells are pre-treated: DMSO, CP466722 or KU55933 prior to IR (0-10Gy). Cells are incubated for 4 hours following IR before media is removed, cells washed (PBS), trypsined, counted and re-plated (2000 cells/plate, 10 cm plates) in the absence of this compound and incubated for 10 days. Prior to colony counting, cells are washed (PBS), stained (PBS, 0.0037%v/v-formaldehyde, 0.1%w/v-crystal violet), rinsed (dH₂O) and dried. Defined populations (>50 cells) are counted as one surviving colony, data are calculated as percentage surviving colonies relative to control plates +/− SE.

Références

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18794134/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24464432/

Validation du produit par le client

: Données de [ PLoS One , 2012 , 7(11), e50423 ]

: Données de [ PLoS One , 2012 , 7(11), e50423 ]

: Données de [ J Neurooncol , 2012 , 110(3), 349-57 ]

: Données de [ J Neurooncol , 2012 , 110(3), 349-57 ]

De Selleck CP-466722 A été cité par 11 Publications

Loss of N-Glycanase 1 Alters Transcriptional and Translational Regulation in K562 Cell Lines [ G3 (Bethesda), 2020, 4;10(5):1585-1597]	PubMed: 32265286
Gene Essentiality Profiling Reveals Gene Networks and Synthetic Lethal Interactions with Oncogenic Ras. [ Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 28162770
A Pharmacogenomic Landscape in Human Liver Cancers. [ Cancer Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 31378681
An Anticancer Drug Cocktail of Three Kinase Inhibitors Improved Response to a Dendritic Cell-Based Cancer Vaccine [ Cancer Immunol Res, 2019, 7(9):1523-1534]	PubMed: 31266784
Upregulation of long noncoding RNA SNHG20 promotes cell growth and metastasis in esophageal squamous cell carcinoma via modulating ATM-JAK-PD-L1 pathway [ J Cell Biochem, 2019, 10.1002/jcb.28444]	PubMed: 30767270
Alleviation of Senescence via ATM Inhibition in Accelerated Aging Models. [ Mol Cells, 2019, 42(3):210-217]	PubMed: 30726661
ATM‑JAK‑PD‑L1 signaling pathway inhibition decreases EMT and metastasis of androgen‑independent prostate cancer. [ Mol Med Rep, 2018, 17(5):7045-7054]	PubMed: 29568923
Simultaneous targeting of ATM and Mcl-1 increases cisplatin sensitivity of cisplatin-resistant non-small cell lung cancer [ Cancer Biol Ther, 2017, 18(8):606-615]	PubMed: 28686074
Monitoring the Activation of the DNA Damage Response Pathway in a 3D Spheroid Model. [Mondesert O, et al. PLoS One, 2015, 10(7):e0134411]	PubMed: 26225756
ATM inhibitor KU-55933 increases the TMZ responsiveness of only inherently TMZ sensitive GBM cells. [Nadkarni A, et al. J Neurooncol, 2012, 110(3):349-57]	PubMed: 23054561

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