Avasimibe

L'Avasimibe à une concentration de 1μg/mL provoque une réduction du cholestérol total (CT) et du cholestérol estérifié (CE) en inhibant la liaison des LDL et en diminuant le nombre de récepteurs « scavenger » lors de la formation de cellules spumeuses dans les macrophages dérivés de monocytes humains (HMM). Ce composé à une concentration de 2μg/mL améliore l'efflux de cholestérol des cellules spumeuses HMM établies, pré-incubées avec 10μg/ml de LDL. [1] Il inhibe l'accumulation de Lipoprotéine(a) dans le milieu de culture d'hépatocytes primaires de singe de manière dose-dépendante avec une inhibition de 11,9 % à 31,3 %, le changement étant principalement associé à une diminution de l'ApoA. [2] Cette substance chimique, incubée à des concentrations de 10 nM, 1 μM et 10 μM pendant 24 heures dans des cellules HepG2, réduit la sécrétion d'ApoB dans le milieu de 25 %, 27 % et 43 %, respectivement. Elle diminue la sécrétion d'ApoB par une dégradation intracellulaire accrue de l'ApoB plutôt que par une diminution de la synthèse d'ApoB. [3] Le composé inhibe l'ACTC avec une IC50 de 3,3 μM dans les macrophages IC-21, en tenant compte de la concentration totale de l'inhibiteur dans l'échantillon de dosage. [4] Il inhibe les isoenzymes humaines P450 CYP2C9, CYP1A2 et CYP2C19 avec une IC50 de respectivement 2,9 μM, 13,9 μM et 26,5 μM. [5] Cet inhibiteur inhibe l'expression d'ACAT-1 et la synthèse d'esters de cholestérol dans les lignées cellulaires de gliome. Il inhibe la croissance des cellules de gliome en induisant un arrêt du cycle cellulaire et une apoptose due à l'activation de la caspase-8 et de la caspase-3. [6]

L'Avasimibe réduit significativement les niveaux de Lipoprotéine(a) et de cholestérol total chez neuf singes mâles sains soumis à un régime alimentaire normal et traités oralement avec du CI-1011 à raison de 30 mg/kg par jour pendant 3 semaines. Les niveaux de Lipoprotéine(a) et de cholestérol total sont réduits à 68 % et 73 % des niveaux de contrôle, respectivement. Ce composé diminue le cholestérol total principalement en raison d'une réduction des lipoprotéines de basse densité (LDL). [2] Il diminue la charge de plaques amyloïdes dans le cortex et l'hippocampe et réduit les niveaux d'Abeta40 et Abeta42 insolubles ainsi que les fragments C-terminaux de la protéine précurseur de l'amyloïde (APP) dans les extraits cérébraux chez de jeunes souris transgéniques humaines APP. Cette substance chimique réduit les plaques amyloïdes diffuses par suppression de l'astrogliose et activation microgliale améliorée chez des souris transgéniques humaines APP âgées. [7]

• P450 Inhibition Studies

  Des microsomes hépatiques humains (HLM) poolés provenant d'au moins 15 donneurs sont utilisés pour tous les tests d'inhibition. Pour les déterminations d'IC50, les sondes de substrat sont utilisées à leurs valeurs de Km in vitro approximatives. Toutes les incubations sont réalisées avec un tampon phosphate de potassium 100 mM (pH 7,4) et 1 mM de NADPH. Pour l'étude d'inhibition du CYP1A2, les incubations sont réalisées dans un volume total de 0,5 ml, en duplicata avec 0,1 mg/ml de HLM, 30 μM de phénacétine, 1 mM de NADPH, et en présence de ce composé (0, 0,3, 0,75, 1,5, 3, 7,5, 15, 30 et 40 μM dans 50 mM) dans un tampon phosphate de potassium à pH 7,4. Après préincubation à 37 °C pendant 7 min, du NADPH est ajouté pour initier la réaction enzymatique. Le mélange réactionnel est stoppé avec 500 μl de 100 ng/ml de paracétamol-D₄/CH₃CN glacé après 25 min. Les standards (4-acétamidophénol, singulet) et les contrôles qualité (triplicata pour les faibles, moyens et élevés) sont préparés à température ambiante. Après mélange, 0,2 ml des échantillons sont transférés dans une autre plaque et soumis à une analyse LC/MS/MS après centrifugation à 3000 tr/min pendant 10 min. Une colonne Supelco Discovery Amide C16, 100 × 2,1 mm (taille de particule de 5 μm) (Supelco, Bellefonte, PA) est utilisée. La phase mobile est isocratique, 40:60 [acétonitrile/acide formique, 0,1 % (v/v)] à 0,2 ml/min.

• Lignées cellulaires

  primary human monocyte-derived macrophages

• Concentrations

  1 μg/mL or 2 μg/mL

• Temps dincubation

  48 hours

• Méthode

  For foam cell formation, the growth medium (RPMI medium containing 10% human serum) is aspirated and the BMMs are rinsed four times with RPMI medium, and then HMMs are exposed to RPMI medium containing bovine serum albumin (BSA, 0.2%) and (DMSO, 0.2%, vehicle for CI-1011) (control medium) with and without agacLDL (100 μg protein/ml) and this compound (1 μg/ml) for 48 hours. For cholesterol efflux experiments, HMMs are preincubated with ag-acLDL (100 μg protein/ml) for 24h, and then exposed to control RPMI medium with and without HDL (100 μg protein/ml), this compound (2 μg/ml) or HDL plus this compound (2 μg/ml) for 24–48 hours. Additionally, the appearance of [¹⁴C]FC in the medium is monitored by first preincubating HMMs with RPMI medium containing ag-acLDL (100 μg protein/ml) radiolabeled with [4-¹⁴C]FC (0.5 μCi/ml) in an ethanolic spritz (final concentration, 0.1%) for 24 h. The medium is removed, cells rinsed three times with RPMI medium, and then cells are exposed to control RPMI medium with and without this compound (1–10 μg/ml) for 4–48 h. At each time point, the medium is aspirated and centrifuged to pellet nonadherent cells. The appearance of [¹⁴C]FC in the medium is measured by liquid scintillation spectroscopy. Cellular lipids are extracted using hexane:isopropanol (3:2, v/v) for 1 h. The distribution of cellular radiolabeled cholesterol is measured by subjecting an aliquot of the cell extract and FC and EC standards to thin layer chromatography using petroleum ether:hexane:glacial acetic acid solvent system (85:15:2, v/v). The percent FC efflux is calculated as: medium [¹⁴C]FC dpm/ cell [¹⁴C] dpm×100. FC and TC mass are quantified by gas liquid chromatography using stigmasterol (1 mg/ml) as an internal standard. EC mass is calculated as the difference between TC and FC, and all values are normalized to cell protein. The MBC is defined as the lowest concentration that exhibited 99.9% or more reduction of the numbers of colonies compared with the cfu in the initial inoculum.

• Modèles animaux

  male cynomolgus monkeys

• Dosages

  30 mg/kg

• Administration

  Orally at a single dose per day for 3 weeks